【摘要】：碳水化合物作為飼料中最廉價(jià)的能源物質(zhì),其合理利用是目前的研究熱點(diǎn)。相比哺乳動(dòng)物,魚類利用碳水化合物的能力較低,但因種類不同而表現(xiàn)出較大的差異。目前研究發(fā)現(xiàn),大口黑鱸(Micropterus salmoides)是肉食性魚類中碳水化合物利用能力較差的一種,生產(chǎn)實(shí)踐中,投喂商品飼料會(huì)導(dǎo)致其在養(yǎng)殖中期出現(xiàn)代謝紊亂、肝臟病變,甚至死亡。為此,本實(shí)驗(yàn)以大口黑鱸為研究對(duì)象,探究飼料中淀粉水平對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)、代謝、抗氧化能力及血清生化指標(biāo)的影響,又通過肝臟轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,從基因?qū)用嫣接懘罂诤邝|對(duì)高淀粉飼料的生理響應(yīng)機(jī)制。1.高淀粉飼料對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)、代謝和抗氧化能力的影響在一種實(shí)用飼料配方的基礎(chǔ)上,分別設(shè)置5%、10%和20%的飼料淀粉水平,配制成3種等氮等能的試驗(yàn)飼料。結(jié)果顯示,飼料淀粉水平顯著影響大口黑鱸的生長(zhǎng)性能。飼養(yǎng)試驗(yàn)的第4周和第12周,20%淀粉水平組特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率均顯著低于5%淀粉水平(P0.05),飼料系數(shù)則相反。在第4周,10%淀粉水平組特定生長(zhǎng)率顯著低于5%淀粉水平(P0.05),但在第12周,10%淀粉水平組特定生長(zhǎng)率與5%淀粉水平?jīng)]有顯著差異(P0.05),且顯著高于20%淀粉水平(P0.05)。20%淀粉水平組肝體比顯著高于5%淀粉水平(P0.05),同時(shí)肝臟和肌肉中糖原含量顯著增加(P0.05)。20%淀粉水平組血漿ALT、AST活性顯著高于5%淀粉水平,血漿TG水平則顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。而ALP、TP、ALB、TC、GLU和胰島素在5%和20%淀粉水平間差異不顯著(P0.05)。20%淀粉水平組大口黑鱸肝臟GK、PFK和PK活性顯著高于5%淀粉水平(P0.05),而PC和FBP活性則顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。飼料淀粉水平對(duì)大口黑鱸HK、PEPCK和G6Pase活性無(wú)顯著影響(P0.05)。20%淀粉水平組大口黑鱸肝臟SOD、CAT活性顯著低于10%、5%淀粉水平,而血漿SOD、CAT和GSH-Px活性顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。各處理組肝臟血漿MDA含量無(wú)顯著差異(P0.05)。由此可見,大口黑鱸能夠適應(yīng)性地調(diào)節(jié)糖代謝酶活性來(lái)響應(yīng)飼料淀粉水平的升高,以增加淀粉在機(jī)體中的氧化分解以及轉(zhuǎn)化貯存,但過高的飼料淀粉水平使肝糖原過量累積致使肝臟受損,抗氧化能力降低,對(duì)大口黑鱸的生長(zhǎng)與健康產(chǎn)生不利影響。2.高淀粉飼料飼喂后大口黑鱸肝臟轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析用淀粉水平為5%(低淀粉組)和25%(高淀粉組)的飼料飼喂大口黑鱸12周后,提取低淀粉組、高淀粉組大口黑鱸肝臟的RNA,采用Illumina HiSeq進(jìn)行高通量測(cè)序。最終共得到326651168個(gè)clean reads、181691個(gè)Unigene,其中81984個(gè)Unigene在7大公共數(shù)據(jù)庫(kù)中成功注釋,占總Unigene數(shù)目的45.12%。對(duì)低淀粉組和高淀粉組大口黑鱸基因表達(dá)水平進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn),兩個(gè)處理組之間總共出現(xiàn)7512個(gè)差異基因,同低淀粉水平相比,高淀粉水平共有3038個(gè)上調(diào)表達(dá)基因,4474個(gè)下調(diào)表達(dá)基因。這些差異基因顯著富集的KEGG通路主要有:過氧化物酶體增生物激活受體-α信號(hào)通路,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工,過氧化物酶體信號(hào)通路,脂肪酸生物合成,不飽和脂肪酸生物合成,淀粉和蔗糖代謝等,這些通路與生長(zhǎng)及能量代謝高度相關(guān)。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證,證明RNA-seq的結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該數(shù)據(jù)對(duì)于深入研究大口黑鱸對(duì)高淀粉飼料的生理適應(yīng)機(jī)制,奠定了良好的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文萄糖的處理。與胰高血糖素一樣，這種多肽在增加葡萄糖在腸上皮細(xì)胞吸收減少葡萄糖的氧化[67]。魚類腹腔注射 GLP-1 后，這兩種效果，可能由細(xì)胞苷酸環(huán)化酶串聯(lián)介導(dǎo)[68]，共同助推高血糖癥的發(fā)生。另外，南方鲇在 GLP后，攝食明顯受到抑制，并出現(xiàn)腸道排空速率提升[69]。這些結(jié)果確定了 GL萄糖中間代謝中起重要作用，并表明腸道是其主要的作用位置。

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖3. 文庫(kù)構(gòu)建原理圖3.1.3.2 cDNA文庫(kù)的質(zhì)量檢測(cè)文庫(kù)的構(gòu)建完成后使用Qubit2.0進(jìn)行初步定量，將文庫(kù)稀釋至1.5ng/ul，再使用Agilent2100檢測(cè)文庫(kù)的insertsize，若insertsize符合預(yù)期，則使用Q-PCR方法 對(duì)文庫(kù)的有效濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量，若文庫(kù)有效濃度 ＞2nM，則可認(rèn)為文庫(kù)質(zhì)量符合要求。3.1.3.3 上機(jī)測(cè)序庫(kù)檢合格后，把不同文庫(kù)按照有效濃度及目標(biāo)下機(jī)數(shù)據(jù)量的需求pooling后進(jìn)行Illumina HiSeq測(cè)序。3.1.4 生物信息分析流程肝臟組織樣品進(jìn)行無(wú)參考基因組的轉(zhuǎn)錄組分析

?3 章 攝食高淀粉飼料后大口黑鱸肝臟的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析27圖4. 信息分析流程圖3.1.4.1 基因功能注釋為了獲得全面的基因功能信息，本試驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行了七大數(shù)據(jù)庫(kù)的基因功能注釋，包括：（1） Nr：NCBI non-redundant protein sequences，NCBI官方的蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)。包括GenBank基因的蛋白編碼序列，PDB(Protein Data Bank)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)、SwissProt蛋白序列及來(lái)自PIR(Protein Information esource)和PRF(ProteinResearch Foundation)等數(shù)據(jù)庫(kù)的蛋白序列。（2） Nt：NCBInucleotidesequences，NCBI官方的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)。包括GenBank，EMBL和DDBJ(不包括EST,STS,GSS,WGS,TSA,PAT,HTG序列)的核酸序列。（3） Pfam：Proteinfamily，最全面的蛋白結(jié)構(gòu)域注釋的分類系統(tǒng)。蛋白質(zhì)由結(jié)構(gòu)域組成

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2794599