【摘要】：碳水化合物作為飼料中最廉價的能源物質(zhì),其合理利用是目前的研究熱點。相比哺乳動物,魚類利用碳水化合物的能力較低,但因種類不同而表現(xiàn)出較大的差異。目前研究發(fā)現(xiàn),大口黑鱸(Micropterus salmoides)是肉食性魚類中碳水化合物利用能力較差的一種,生產(chǎn)實踐中,投喂商品飼料會導(dǎo)致其在養(yǎng)殖中期出現(xiàn)代謝紊亂、肝臟病變,甚至死亡。為此,本實驗以大口黑鱸為研究對象,探究飼料中淀粉水平對大口黑鱸生長、代謝、抗氧化能力及血清生化指標的影響,又通過肝臟轉(zhuǎn)錄組學分析,從基因?qū)用嫣接懘罂诤邝|對高淀粉飼料的生理響應(yīng)機制。1.高淀粉飼料對大口黑鱸生長、代謝和抗氧化能力的影響在一種實用飼料配方的基礎(chǔ)上,分別設(shè)置5%、10%和20%的飼料淀粉水平,配制成3種等氮等能的試驗飼料。結(jié)果顯示,飼料淀粉水平顯著影響大口黑鱸的生長性能。飼養(yǎng)試驗的第4周和第12周,20%淀粉水平組特定生長率、蛋白質(zhì)效率均顯著低于5%淀粉水平(P0.05),飼料系數(shù)則相反。在第4周,10%淀粉水平組特定生長率顯著低于5%淀粉水平(P0.05),但在第12周,10%淀粉水平組特定生長率與5%淀粉水平?jīng)]有顯著差異(P0.05),且顯著高于20%淀粉水平(P0.05)。20%淀粉水平組肝體比顯著高于5%淀粉水平(P0.05),同時肝臟和肌肉中糖原含量顯著增加(P0.05)。20%淀粉水平組血漿ALT、AST活性顯著高于5%淀粉水平,血漿TG水平則顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。而ALP、TP、ALB、TC、GLU和胰島素在5%和20%淀粉水平間差異不顯著(P0.05)。20%淀粉水平組大口黑鱸肝臟GK、PFK和PK活性顯著高于5%淀粉水平(P0.05),而PC和FBP活性則顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。飼料淀粉水平對大口黑鱸HK、PEPCK和G6Pase活性無顯著影響(P0.05)。20%淀粉水平組大口黑鱸肝臟SOD、CAT活性顯著低于10%、5%淀粉水平,而血漿SOD、CAT和GSH-Px活性顯著低于5%淀粉水平(P0.05)。各處理組肝臟血漿MDA含量無顯著差異(P0.05)。由此可見,大口黑鱸能夠適應(yīng)性地調(diào)節(jié)糖代謝酶活性來響應(yīng)飼料淀粉水平的升高,以增加淀粉在機體中的氧化分解以及轉(zhuǎn)化貯存,但過高的飼料淀粉水平使肝糖原過量累積致使肝臟受損,抗氧化能力降低,對大口黑鱸的生長與健康產(chǎn)生不利影響。2.高淀粉飼料飼喂后大口黑鱸肝臟轉(zhuǎn)錄組學分析用淀粉水平為5%(低淀粉組)和25%(高淀粉組)的飼料飼喂大口黑鱸12周后,提取低淀粉組、高淀粉組大口黑鱸肝臟的RNA,采用Illumina HiSeq進行高通量測序。最終共得到326651168個clean reads、181691個Unigene,其中81984個Unigene在7大公共數(shù)據(jù)庫中成功注釋,占總Unigene數(shù)目的45.12%。對低淀粉組和高淀粉組大口黑鱸基因表達水平進行分析后發(fā)現(xiàn),兩個處理組之間總共出現(xiàn)7512個差異基因,同低淀粉水平相比,高淀粉水平共有3038個上調(diào)表達基因,4474個下調(diào)表達基因。這些差異基因顯著富集的KEGG通路主要有:過氧化物酶體增生物激活受體-α信號通路,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工,過氧化物酶體信號通路,脂肪酸生物合成,不飽和脂肪酸生物合成,淀粉和蔗糖代謝等,這些通路與生長及能量代謝高度相關(guān)。用實時熒光定量PCR進行驗證,證明RNA-seq的結(jié)果準確可靠。該數(shù)據(jù)對于深入研究大口黑鱸對高淀粉飼料的生理適應(yīng)機制,奠定了良好的基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4
【圖文】：

西南大學碩士學位論文萄糖的處理。與胰高血糖素一樣，這種多肽在增加葡萄糖在腸上皮細胞吸收減少葡萄糖的氧化[67]。魚類腹腔注射 GLP-1 后，這兩種效果，可能由細胞苷酸環(huán)化酶串聯(lián)介導(dǎo)[68]，共同助推高血糖癥的發(fā)生。另外，南方鲇在 GLP后，攝食明顯受到抑制，并出現(xiàn)腸道排空速率提升[69]。這些結(jié)果確定了 GL萄糖中間代謝中起重要作用，并表明腸道是其主要的作用位置。

西南大學碩士學位論文26圖3. 文庫構(gòu)建原理圖3.1.3.2 cDNA文庫的質(zhì)量檢測文庫的構(gòu)建完成后使用Qubit2.0進行初步定量，將文庫稀釋至1.5ng/ul，再使用Agilent2100檢測文庫的insertsize，若insertsize符合預(yù)期，則使用Q-PCR方法 對文庫的有效濃度進行準確定量，若文庫有效濃度 ＞2nM，則可認為文庫質(zhì)量符合要求。3.1.3.3 上機測序庫檢合格后，把不同文庫按照有效濃度及目標下機數(shù)據(jù)量的需求pooling后進行Illumina HiSeq測序。3.1.4 生物信息分析流程肝臟組織樣品進行無參考基因組的轉(zhuǎn)錄組分析

?3 章 攝食高淀粉飼料后大口黑鱸肝臟的轉(zhuǎn)錄組學分析27圖4. 信息分析流程圖3.1.4.1 基因功能注釋為了獲得全面的基因功能信息，本試驗對樣品進行了七大數(shù)據(jù)庫的基因功能注釋，包括：（1） Nr：NCBI non-redundant protein sequences，NCBI官方的蛋白序列數(shù)據(jù)庫。包括GenBank基因的蛋白編碼序列，PDB(Protein Data Bank)蛋白數(shù)據(jù)庫、SwissProt蛋白序列及來自PIR(Protein Information esource)和PRF(ProteinResearch Foundation)等數(shù)據(jù)庫的蛋白序列。（2） Nt：NCBInucleotidesequences，NCBI官方的核酸序列數(shù)據(jù)庫。包括GenBank，EMBL和DDBJ(不包括EST,STS,GSS,WGS,TSA,PAT,HTG序列)的核酸序列。（3） Pfam：Proteinfamily，最全面的蛋白結(jié)構(gòu)域注釋的分類系統(tǒng)。蛋白質(zhì)由結(jié)構(gòu)域組成

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本文編號：2794599