【摘要】：本試驗(yàn)運(yùn)用免疫學(xué)的方法檢測了花羔紅點(diǎn)鮭在不同季節(jié)時(shí)血液中的卵黃蛋白原含量。通過對花羔紅點(diǎn)鮭不同季節(jié)時(shí)血液中卵黃蛋白原含量變化的研究,能夠更加深入地了解花羔紅點(diǎn)鮭卵黃蛋白原的理化性質(zhì),并了解花羔紅點(diǎn)鮭體內(nèi)卵黃蛋白原數(shù)量與其性成熟程度之間的關(guān)系,這為今后開展鮭科魚類的卵黃蛋白原發(fā)生及合成途徑等方面的研究工作提供了理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)使用3齡花羔紅點(diǎn)鮭作為試驗(yàn)對象,腹腔注射雌二醇誘導(dǎo)其產(chǎn)生卵黃蛋白原,采用Sephacryl S-300丙烯葡聚糖凝膠層析的方法分離和純化花羔紅點(diǎn)鮭卵黃蛋白原,并對其理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明:使用Sephacryl S-300丙烯葡聚糖凝膠層析法純化血漿中的卵黃蛋白原的效果十分明顯。試驗(yàn)對純化后的卵黃蛋白原進(jìn)行了Native-PAGE和SDS-PAGE電泳,結(jié)果表明,花羔紅點(diǎn)鮭卵黃蛋白原的分子量約為590 kDa,其亞基分子量約為200 kDa。本試驗(yàn)運(yùn)用血漿中分離純化之后的卵黃蛋白原作為抗原免疫家兔,制備了兔抗卵黃蛋白原抗血清,并對此抗血清的特異性進(jìn)行檢測。由于卵黃蛋白原抗血清具有高度特異性,因此建立間接酶聯(lián)免疫吸附方法測定卵黃蛋白原在花羔紅點(diǎn)鮭血液內(nèi)的含量。兔抗卵黃蛋白原抗血清的最佳工作濃度為1:32000,包被卵黃蛋白原的最佳工作濃度為130.7 ng/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測范圍在32.6ng/mL至2094.5ng/mL之間,批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)分別為4.612%和4.337%。本試驗(yàn)運(yùn)用ELISA方法檢測了花羔紅點(diǎn)鮭在各個(gè)季節(jié)血液中卵黃蛋白原含量的變化,結(jié)果表明:花羔紅點(diǎn)鮭體內(nèi)的卵黃蛋白原含量呈現(xiàn)周期性變化,每年產(chǎn)卵前的6月份體內(nèi)卵黃蛋白原含量達(dá)到極高水平,然后逐漸降低,產(chǎn)孵后的12月份體內(nèi)卵黃蛋白原含量降至極低的水平,隨后的幾個(gè)月血液中卵黃蛋白原含量又開始逐漸升高。參照以往的研究和本試驗(yàn)結(jié)果,表明卵黃蛋白原是存在于花羔紅點(diǎn)鮭血液中的一種雌性特異蛋白,卵黃蛋白原是卵黃蛋白的前體,而卵黃蛋白對胚胎和初期仔魚發(fā)育極為重要,因此卵黃蛋白原對魚類的繁殖和營養(yǎng)有著重要意義。卵黃蛋白原在血液中的含量是不斷變化的,本試驗(yàn)研究了花羔紅點(diǎn)鮭體內(nèi)卵黃蛋白原的理化性質(zhì)和其含量的變化,本次試驗(yàn)結(jié)果為今后能夠更加充分了解花羔紅點(diǎn)鮭的繁殖生理特點(diǎn)提供了一定的試驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù),并且對花羔紅點(diǎn)鮭的養(yǎng)殖、保護(hù)、開發(fā)和利用都有著十分重要的意義。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【圖文】：

（見圖3.1）結(jié)果表明,誘導(dǎo)組雌魚和對照組雌魚血漿的電泳條帶明顯比對照組雄魚多出了大分子質(zhì)量條帶，符合了Vg是雌性特異蛋白這一性質(zhì)，而且誘導(dǎo)組雌魚和對照組雌魚的電泳條帶有明顯的不同，初步判斷這是受E2誘導(dǎo)的結(jié)果。M 1 2 3669kDa440kDa232kDa140kDa66kda圖 3.1 花羔紅點(diǎn)鮭經(jīng)誘導(dǎo)后的 Native-PAGE 圖譜M：蛋白 Marker；1：對照組雄魚血漿的電泳條帶；2：誘導(dǎo)組雌魚血漿的電泳條帶；3：對照組雌魚血漿的電泳條帶Fig.3.1 Native-PAGE of Salvelinus malm Vg induced by E2M:Protein marker.1: control male. 2: E2induced female

利用丙烯葡聚糖凝膠 Sephacryl S-300 層析柱來分離蛋白質(zhì)，在 280 nm光的吸收值。由圖 3.2 可見，Sephacryl S-300 的分離效果比較好，共產(chǎn)峰，純化效果達(dá)到了預(yù)期。把第一個(gè)洗脫峰收集起來之后，用 20%聚乙濃縮。

.3 花羔紅點(diǎn)鮭卵黃蛋白原經(jīng)純化后 Native-PAGEative-PAGE of purified Salvelinus malm Vg by Sepha

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2793169