發(fā)布時(shí)間：2020-08-07 06:45

【摘要】：黃唇魚(Bahaba flavolabiata)是中國特有物種,僅分布于南海北部和東海南部沿海。由于環(huán)境的急劇惡化和過度捕撈,其資源迅速減少,瀕臨滅絕,開展保護(hù)性研究工作迫在眉睫。目前黃唇魚各方面的研究資料還比較匱乏,鑒于此,本文一方面通過黃唇魚SSR標(biāo)記的開發(fā)和遺傳多樣性分析,以期為黃唇魚的種質(zhì)資源鑒定和保育等研究奠定理論基礎(chǔ);另一方面通過消化道的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)及黏液細(xì)胞分布規(guī)律的研究,了解其消化和吸收特征,為該魚的人工養(yǎng)殖提供技術(shù)支撐。1.基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)進(jìn)行黃唇魚SSR標(biāo)記開發(fā)本研究使用Illumina Hiseq測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行黃唇魚轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,共獲得13.43GB數(shù)據(jù)。經(jīng)組裝并去冗余后得到65,047個(gè)Unigene,檢測(cè)出29,797個(gè)SSR位點(diǎn),分布于19,664個(gè)Unigene中。SSR位點(diǎn)分布類型與特征分析顯示,最主要的重復(fù)類型為二核苷酸重復(fù)(39.8%),其次為一核苷酸重復(fù)(32.5%)和三核苷酸重復(fù)(22.4%)。二核苷酸重復(fù)中的基序主要是AC/GT(占總量的28%)。本研究利用Primer3軟件總共設(shè)計(jì)出26949對(duì)引物。隨機(jī)選取186對(duì)引物,以6個(gè)黃唇魚樣品為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增;121對(duì)引物成功擴(kuò)增出預(yù)期片段,其中47對(duì)引物表現(xiàn)出多態(tài)性。結(jié)果表明,利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)大規(guī)模開發(fā)黃唇魚SSR標(biāo)記是可行的,開發(fā)的SSR標(biāo)記可以為評(píng)估黃唇魚群體的遺傳多樣性奠定基礎(chǔ)。2.通過SSR標(biāo)記評(píng)估黃唇魚自然群體的遺傳多樣性水平本文通過雙重?zé)晒釶CR反應(yīng),篩選出29對(duì)多態(tài)性較高的SSR引物,對(duì)19個(gè)黃唇魚樣本進(jìn)行遺傳多樣性分析,結(jié)果顯示:29個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)(Na)分別為2-7個(gè),等位基因總數(shù)為121個(gè),平均等位基因數(shù)目為4.17個(gè)。有效等位基因(Ne)在1.0606-6.0561之間,總和為85.2050。表觀雜合度(Ho)和期望雜合度(He)的平均值分別為0.6593和0.5973。多態(tài)性信息含量PIC值在0.0555-0.8137之間,平均值為0.5423。5個(gè)位點(diǎn)顯著偏離Hardy-Weinberg平衡(校正P≤0.05)�；蜇S富度Rs在2-6.976之間,總和為119.638�；蚨鄻有�(GD)在0.059-0.856之間。這些數(shù)據(jù)顯示黃唇魚群體遺傳多樣性水平處于高等水平。3.黃唇魚消化系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)及黏液細(xì)胞分布特征利用石蠟切片、HE和阿利新蘭 高碘酸雪夫 試劑(AB-PAS(Alician blue and periodic acid Schiff reagent AB,p H2.5))染色技術(shù)研究黃唇魚消化系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)和黏液細(xì)胞的分布特征。黃唇魚食道粗而短,胃呈“卜”形,分為賁門部、盲囊部和幽門部,胃與腸的連接處有8個(gè)幽門盲囊,腸道在體腔內(nèi)迂回2個(gè)曲折。光鏡下觀察到消化管管壁由外至內(nèi)依次為外膜、肌肉層、黏膜下層和黏膜層。食道肌肉層很厚,黏膜層很薄未見黏液細(xì)胞分布。胃部肌肉層和黏膜層均很厚,黏膜固有層分布胃腺,黏膜上皮為單層柱狀上皮。幽門盲囊管腔很大,但肌肉層很薄。腸道肌肉層較厚,黏膜皺褶較細(xì)長,黏膜上皮細(xì)胞間可見圓形的黏液細(xì)胞。肝臟內(nèi)彌散分布胰腺組織,肝小葉內(nèi)可見大量糖原空泡。AB-PAS染色檢測(cè)到胃部分布為紅色的Ⅰ型黏液細(xì)胞;幽門盲囊黏膜上皮分布大量藍(lán)色的黏液細(xì)胞,為Ⅱ型黏液細(xì)胞;前腸、中腸和后腸檢測(cè)到大量Ⅱ型黏液細(xì)胞,并有少量Ⅰ型黏液細(xì)胞。黃唇魚消化系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)以及黏液細(xì)胞分布特征體現(xiàn)了食性與結(jié)構(gòu)功能相協(xié)調(diào)的特點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文后逐個(gè)累加至所有Unigene總長度的50%時(shí)，最后一個(gè)累加的數(shù)值大小即為N50）以及 GC 含量分別為 69，382,127bp、1,066 bp、2,032 bp 和 46.65 %。Unigene的長度分布（見圖 2-1），從圖中可以看出最小片段長度為 300bp，數(shù)目最多，為

圖 2-2 黃唇魚基因 NR 注釋物種分布圖Fig.2-2 Distribution of annotated species of B. flavolabiat2.3 Unigene 的功能分類

圖 2-3 黃唇魚 COG 功能分布統(tǒng)計(jì)圖Fig.2-3 Functional distribution of COG annotation of B. flavolabiat注: X 軸代表相應(yīng)的 Unigene 數(shù)目，Y 軸代表 COG 功能分類。Note：X axis represents the number of Unigenes. Y axis represents the COG functional category.

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