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基于櫛孔扇貝的PAHs生物監(jiān)測技術的研究

發(fā)布時間:2020-08-01 12:44
【摘要】:多環(huán)芳烴(PAHs)作為持久性有毒污染物(PTS)的一種,廣泛存在于自然界各種介質中。PAHs易附著,難降解,半揮發(fā),可蓄積在生物體內,危害神經系統、免疫系統、內分泌系統、生殖發(fā)育系統等。歐洲食品安全委員會(EFSA)建議將苯并(a)蒽(BaA),苯并(a)芘(BaP),苯并(b)熒蒽(BbF)和 (CHR)等四種多環(huán)芳烴納入一個新的評估標準(EC 835/2011),并認為這四種多環(huán)芳烴的總量是衡量食品中多環(huán)芳烴污染較為合理的指標。本論文選擇中國北方沿海主要經濟貝類之一的櫛孔扇貝Chlamys farreri為研究對象,進行了PAHs肋、迫下扇貝基因表達譜的高通量分析,PAHs在扇貝體內的累積特征的研究以及扇貝在PAHs脅迫下解毒代謝過程的研究。設計實驗分析了PAHs脅迫對櫛孔扇貝蓄積能力、解毒代謝酶活力和關鍵基因表達量以及損傷指標的影響,為我國近岸海域PAHs虧染監(jiān)測提供技術支撐。1.櫛孔扇貝在PAHs脅迫下基因表達譜的高通量分析本章選取2μg/L PAHs脅迫10天的櫛孔扇貝Chlamys farreri肖化盲囊為研究對象,利用高通量測序(RNA-seq)技術,分析了櫛孔扇貝的基因表達譜。結果表明:PAHs混合污染物脅迫10天后,櫛孔扇貝消化盲囊共有469個基因對照組相對差異表達,其中209個基因上調,260個基因下調。解毒代謝,抗氧化等生物過程相關的基因發(fā)生了顯著的差異表達,CYP450 2P1比CYP3A2更為適合作為基于櫛孔扇貝的監(jiān)測PAHs污染的生物標志物。并且,本實驗將醌氧化還原酶(Q0)作為監(jiān)測PAHs污染的生物標志物,這在其他文獻中少有報道。并且本實驗中PAHs混合脅迫抑制了GST的基因表達,這為GST作為雙殼貝類生物標志物提供了新的證據。但是由于海洋生態(tài)系統環(huán)境復雜,污染物種類繁多,選擇適合的生物標志物監(jiān)測海洋環(huán)境污染,仍需更多的研究。2.PAHs對櫛孔扇貝毒性效應的研究本章研究了櫛孔扇貝Chlamys farreri在4種PAHs(BaP:BbF:CHR:BaA=5:3:1:1)混合脅迫下累積特征、解毒代謝指標和損傷效應。實驗分為對照組(自然海水)和染毒組(0.02μg/L 0.2μg/L 2μg/L),取樣時間點為0、1、3、6、10、15、21d,測定了扇貝的鰓、消化盲囊、軟體部和閉殼肌中PAHs累積含量、鰓和消化盲囊中Ⅰ相代謝、Ⅱ相代謝和抗氧化防御系統的酶活力、活性物含量以及相關基因表達量、損傷指標。結果顯示:櫛孔扇貝組織中累積規(guī)律為:消化盲囊鰓軟體部閉殼;PAHs各組分累積規(guī)律為:CHR≈BaABbFBaP。I相代謝指標中,EH、DD酶活力趨勢為先升高后穩(wěn)定,在第6d達到最大值。染毒組與對照組差異顯著,中低濃度處理組之間差異不顯著。EH、DD mRNA呈現相似的峰值變化,在第10d達到最大值。酶活力和基因表達均無組織特異性。Ⅱ相代謝指標中,中低濃度處理組的GST、UGT各處理組和SULT各處理酶活力先升高后穩(wěn)定,GST于第10天達到最大值,UGT和SULT在第3d。相關基因表達與酶活力變化大致相同,均無組織特異性?寡趸烙笜酥,SOD酶活力在第10天達到最大值后逐漸穩(wěn)定,并表現出顯著的時間劑量效應,但無組織間差異。但是基因表達呈現相反趨勢,表達先升高后降低,但未恢復到初始水平。GSH/GSSG除與對照組差異顯著外,各染毒組均無時間-劑量效應。損傷指標中, F值先降低后升高,并于染毒濃度呈現負相關;MDA含量先升高后降低,高濃度處理組與對照組差異顯著;PC含量先升高后穩(wěn)定,處理組之間差異顯著。由此可見,小分子量的CHR和BaA更容易被扇貝蓄積,扇貝消化盲囊的蓄積能力最強。扇貝GST、SOD和F值可作為監(jiān)測海洋PAHs污染的評價指標。
【學位授予單位】:中國海洋大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:S917.4

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本文編號:2777474

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