發(fā)布時間：2020-07-27 09:27

【摘要】：本研究采用營養(yǎng)學、生物化學、分子生物學及細胞生物學相關技術與方法,借助核磁共振成像技術較為系統(tǒng)地研究了羅非魚中不同部位脂肪組織的差異性以及外源性脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖和分化的影響。本實驗首先借助核磁共振成像技術和HE染色,確定了羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織在分布位置及形態(tài)結構上的差異性。之后,在活體和細胞水平上確定了羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織不同的代謝功能,發(fā)現皮下脂肪組織代謝旺盛,腹腔脂肪組織過度沉積則對魚類生命活動產生負面影響。為了進一步了解營養(yǎng)條件對羅非魚脂肪組織沉積的影響,本文通過建立羅非魚脂肪細胞培養(yǎng)模型,以分析外源性脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖分化的影響,為解決當前水產養(yǎng)殖中魚類脂肪過度沉積提供新的技術手段。本文主要的研究結果和結論如下:1.羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織的差異性不同部位脂肪組織差異性研究主要集中在哺乳動物上,目前已知腹腔和皮下脂肪組織在分布,形態(tài)特征以及代謝功能方面存在極大的差異性。腹腔脂肪可降低胰島素敏感性,誘發(fā)糖尿病、高血壓以及高血糖等代謝綜合征,不同的是,皮下脂肪組織可以提高機體的胰島素敏感性。然而,在魚類中未見到系統(tǒng)性的關于腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織差異性的研究。為了探究羅非魚中腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織的差異性,本工作首先借助核磁共振成像技術和HE染色,確定了羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織在分布位置及形態(tài)結構上的差異性。之后,在活體和細胞水平確定了羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組織不同的代謝功能。我們的研究結果顯示:與腹腔脂肪組織相比,皮下脂肪組織的細胞更大,脂解效率更高,細胞內線粒體數量更多,脂肪酸β氧化、脂合成和棕色脂肪標志基因表達更高,并且炎癥和分化基因表達水平較低�？傊�,皮下脂肪組織代謝活動更為旺盛,而腹腔脂肪組織是羅非魚主要的脂肪儲存組織,其過度沉積對魚類生命活動可能產生負面影響。這與哺乳動物上,腹腔脂肪組織沉積引發(fā)高血糖,高血脂等代謝疾病,皮下脂肪組織可以提高胰島素敏感性的研究相一致。2.羅非魚脂肪細胞體外培養(yǎng)體系的建立前一部分工作已經表明,腹腔脂肪組織過度增大可能對羅非魚代謝活動產生負面影響。脂肪組織增大主要是由脂肪組織增生(脂肪細胞增殖)和肥大(脂肪細胞分化)導致的。因此,本部分工作的主要內容是建立羅非魚脂肪細胞體外培養(yǎng)及分化體系,為隨后進一步探討外源營養(yǎng)物質對脂肪細胞增殖和分化的影響提供細胞平臺。無菌條件下,分離出羅非魚腹腔前脂肪細胞,以2～3×105個/ml的培養(yǎng)在含15%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中;28℃、5%C02條件下培養(yǎng)7天,細胞長滿后進行誘導。誘導結束,用油紅O染色法對胞內的脂滴進行染色,在顯微鏡下觀察拍照。3.不同脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖和分化的影響本部分工作中,首先利用已經建立的羅非魚脂肪細胞培養(yǎng)和分化體系,在脂肪細胞增殖過程添加四種外源脂肪酸:棕櫚酸(PA)、油酸(OA)、亞油酸(LA)、亞麻酸(LNA)以探討脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖的影響。結果發(fā)現:1)外源性脂肪酸尤其是不飽和脂肪酸對脂肪細胞有顯著的促增殖作用。不飽和脂肪脂肪酸(OA、LA、LNA)的促增殖作用與濃呈正相關,而飽和脂肪酸(PA)則出現相反的趨勢,即脂肪酸的濃度升高,對細胞的促增殖作用減弱2)外源脂肪酸可能是通過抑制脂滴體積的增大,阻止較小脂滴融合為較大脂滴,導致脂肪細胞中的脂滴積累下降,進而抑制細胞分化;3)培養(yǎng)基中添加脂肪酸可以抑制脂合成,同時促進脂代謝(β-氧化)。另外我們發(fā)現,脂肪酸β氧化可以優(yōu)先于脂質水解過程,以分解胞內多余的脂質。綜上所述,我們認為羅非魚腹腔脂肪組織和皮下脂肪組在分布位置、形態(tài)特征和代謝功能上存在差異性。羅非魚皮下脂肪組織代謝更為活躍,腹腔脂肪組織過量沉積會對機體代謝產生負面影響。雖然外源脂肪酸可以促進羅非魚脂肪細胞增殖和分化,但是魚體內的腹腔脂肪過度沉積時,前脂肪細胞的數量減少,對脂肪酸的吸收轉化能力減弱。通常來講,多不飽和脂肪酸(LA,LNA)的對羅非魚前脂肪細胞的促增殖作用要優(yōu)于單不飽和脂肪酸(OA)和飽和脂肪酸(PA)。不飽和脂肪酸(OA,LA,LNA)對羅非魚細胞促增殖作用與濃度成正相關;而飽和脂肪酸(PA)則出現相反的趨勢。在羅非魚脂肪細胞分化方面,脂肪酸可以抑制脂肪細胞分化,且飽和脂肪酸的抑制作用略為顯著。本文的這些工作,首次揭示了羅非魚的脂肪組織和脂肪細胞的一些營養(yǎng)代謝特征,為人們進一步了解魚類營養(yǎng)代謝機制提供了新的證據。
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

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本文編號：2771662