【摘要】：“益生菌是指含有生理性活菌或死菌(包括其菌體和代謝產(chǎn)物),攝取后能夠改善黏膜表面的微生物群或酶的平衡,或刺激機(jī)體特異性或非特異性免疫應(yīng)答機(jī)制,增強(qiáng)定植能力或免疫能力的微生物”現(xiàn)代益生菌概念及理解:除上述表象外,益生菌的必需性(例如人及動(dòng)物的免疫系統(tǒng)發(fā)育的必需性等);益生菌的免疫調(diào)節(jié)特性等。水產(chǎn)益生菌領(lǐng)域要比陸生動(dòng)物益生菌的研究和應(yīng)用要相對(duì)晚一些,近年來(lái)水產(chǎn)益生菌的研究及使用才有所發(fā)展。益生菌的使用已成為促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)和控制疾病的重要手段。具有以下優(yōu)點(diǎn):減輕人力消耗降低費(fèi)用;增加免疫受免動(dòng)物的比例;可作為口服活載體疫苗載體攜帶抗原;減輕魚體應(yīng)激反應(yīng)。本研究目的:從天然水域獲得的健康虹鱒魚為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,從其腸道等部位低溫分離純化菌株。經(jīng)過(guò)益生特性篩選得到具有良好益生特性的菌株;再對(duì)篩選出的益生菌進(jìn)行抗感染篩選,獲取具有抗病毒能力的嗜冷益生菌株。意義:為虹鱒嗜冷益生菌黏膜活載體疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。本研究是以遼寧省本溪市自然水域獲得散養(yǎng)健康虹鱒魚為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,立即在實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌條件下進(jìn)行迫殺、低溫分離腸道等部位菌株;對(duì)分離菌株進(jìn)行溫度梯度篩選,獲得虹鱒嗜冷菌株;通過(guò)分子生物學(xué)方法對(duì)嗜冷菌株進(jìn)行鑒定,除去致病菌及條件致病菌;對(duì)虹鱒嗜冷益生菌株的進(jìn)行體外益生特性篩選,確定嗜冷益生菌株候選菌株;對(duì)虹鱒嗜冷益生菌株進(jìn)行抗病毒特性初步篩選;再運(yùn)用TNF-αactivitated HT29-cells and PBMCs System對(duì)候選菌株進(jìn)行第二重抗病毒篩選;經(jīng)過(guò)多重篩選得到的6株虹鱒嗜冷益生菌株與1‰傳染性造血器官壞死病病毒(IHNV)的EPC細(xì)胞共培養(yǎng)測(cè)定培養(yǎng)上清中的病毒滴度,以確定候選菌株體外抗病毒能力;對(duì)6株虹鱒嗜冷益生菌株進(jìn)行生理生化試驗(yàn),確定最適培養(yǎng)基、最適溫度及最適生長(zhǎng)pH;對(duì)篩選出的候選菌株進(jìn)行環(huán)境壓力耐受測(cè)試,耐高膽酸游離酸試驗(yàn)、耐低p H試驗(yàn);探索菌株微膠囊化方式以及優(yōu)化;制定飼喂程序進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)候選菌株進(jìn)行安全性評(píng)價(jià);連續(xù)飼喂7天后進(jìn)行8倍的LD50進(jìn)行攻毒IHNV(Sn1203株),對(duì)6株候選菌株的體內(nèi)抗病毒能力進(jìn)行驗(yàn)證及飼喂候選菌株免疫效果評(píng)價(jià),測(cè)定試驗(yàn)過(guò)程中血清中總補(bǔ)體(ACH50)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LYS)、IgM及IL-2含量變化;測(cè)定血清抗體效價(jià)。從虹鱒魚體內(nèi)腸道等部位低溫分離得到83株虹鱒分離菌;通過(guò)溫度梯度篩選得到嚴(yán)格嗜冷菌株18株。通過(guò)嗜冷菌株體外益生特性篩選,經(jīng)三重體外抗病毒特性篩選方法,得到了6株具有較高體外抗病毒能力的虹鱒魚體嗜冷益生菌株;采用微膠囊化的方法包被6株虹鱒魚體嗜冷益生菌株候選菌株連續(xù)飼喂動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證其具有良好的益生特性及安全性;隨后背鰭注射攻毒,驗(yàn)證多重體外抗病毒篩選方法有效、候選菌株具有良好的體內(nèi)抗病毒特性,其中32#(Lactococcus lactis subsp.HL1)菌株、10#(Arthrobacter sp.HL4)菌株及58#(Bacillus sp.HL5)菌株具有良好的益生特性及抗病毒特性,能夠刺激機(jī)體免疫應(yīng)答,對(duì)IHNV感染有一定保護(hù)作用,測(cè)定免疫保護(hù)力(RPS)最高達(dá)到22.5%。其中32#乳酸乳球菌亞種(Lactococcus lactis subsp.HL1)菌株能夠在0.5%的高膽酸游離酸及pH4.0培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng),在候選菌株安全性以及攻毒保護(hù)免疫評(píng)價(jià)均表現(xiàn)出優(yōu)良的益生特性及抗病毒特性,血清中總補(bǔ)體(ACH50)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LYS)、Ig M及IL-2含量與對(duì)照組差異顯著(P0.05)、且高于其它試驗(yàn)菌株。32#乳酸乳球菌亞種(Lactococcus lactis subsp.HL1)具有抗病毒能力,具有良好的益生及抗IHNV病毒特性。為虹鱒嗜冷益生菌黏膜活載體疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.1

【參考文獻(xiàn)】

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2 鄺哲師,田興山,張玲華,周風(fēng)珍,陳薇;芽孢桿菌制劑對(duì)斷奶仔豬體內(nèi)消化酶活性的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2005年06期

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