【摘要】：近年來(lái)大黃魚病害頻發(fā),特別是由變形假單胞菌引起的內(nèi)臟白點(diǎn)病,已造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究中的變形假單胞菌NZBD11是典型的條件致病菌,僅在16~20°C致病,溫度對(duì)其致病性影響較大,在18°C時(shí)會(huì)導(dǎo)致內(nèi)臟白點(diǎn)病的發(fā)生,當(dāng)水溫大于28°C或小于16°C時(shí)疾病自然消退。因此選擇低溫不致病溫度12?C、高發(fā)致病溫度18?C和高溫不致病溫度28?C對(duì)研究該菌ECP的致病性具有重要意義。本研究以期為闡明變形假單胞菌的致病機(jī)理提供理論資料,并為該病的防治提供一定的科學(xué)依據(jù)。利用玻璃紙覆蓋平板技術(shù)制備變形假單胞菌的ECP,經(jīng)初步測(cè)定,該ECP有蛋白酶、淀粉酶、卵磷脂酶、磷酸酯酶和溶血活性,又檢測(cè)出絲氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸蛋白酶類、類胃蛋白酶、類糜蛋白酶、氨肽酶和酸性、堿性磷酸酯酶活性;未檢測(cè)出明膠酶、脂肪酶、脲酶及金屬蛋白酶類活性。將變形假單胞菌NZBD11置于12?C、18?C和28?C下培養(yǎng)、制備ECP,研究培養(yǎng)溫度對(duì)ECP酶活性及溶血活性的影響,結(jié)果表明氨肽酶、酸性、堿性磷酸酯酶和溶血活性不受培養(yǎng)溫度的影響,除淀粉酶外,半胱氨酸、天冬氨酸、絲氨酸蛋白酶類、類胃蛋白酶、卵磷脂酶、類糜蛋白酶,在18?C下較其他兩個(gè)溫度有更高的酶活性,初步推測(cè)這些酶活性與變形假單胞菌的毒性密切相關(guān);用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析不同培養(yǎng)溫度來(lái)源的ECP,結(jié)果顯示三種不同培養(yǎng)溫度來(lái)源的ECP都有20多條蛋白條帶,但是帶寬和染色深淺有差異,尤其是50 kDa、43 kDa和28 kDa蛋白條帶在18?C時(shí)表達(dá)的量異于在12?C和28?C時(shí)的表達(dá)量。在內(nèi)臟白點(diǎn)病的高發(fā)溫度(18?C)培養(yǎng)變形假單胞菌并制備ECP,測(cè)定不同溫度(12?C、18?C和28?C)下ECP的酶活力,結(jié)果顯示ECP的淀粉酶、絲氨酸、天冬氨酸蛋白酶類、類胃蛋白酶、類糜蛋白酶、卵磷脂酶、酸性和堿性磷酸酯酶活性受溫度的影響比較大,28?C條件下酶活力顯著(P0.05)高于12?C或者18?C時(shí)的酶活力;半胱氨酸蛋白酶類、氨肽酶活性和溶血活性受溫度影響沒(méi)有顯著性變化(P0.05)。結(jié)果表明雖然變形假單胞菌ECP是其致病因素之一,但大黃魚內(nèi)臟白點(diǎn)病在特定溫度(16~20?C)高發(fā)并非由于ECP在該溫度下的活性較高。結(jié)合培養(yǎng)溫度、環(huán)境溫度對(duì)變形假單胞菌ECP組分的影響實(shí)驗(yàn),顯示變形假單胞菌ECP中的酶活性,尤其是可能與菌體毒性密切相關(guān)的天冬氨酸、絲氨酸、半胱氨酸蛋白酶類、類胃蛋白酶、類糜蛋白酶和卵磷脂酶,在發(fā)病溫度(18?C)并未表現(xiàn)出比不發(fā)病溫度(12?C和28?C)更高的活力,這說(shuō)明雖然變形假單胞菌ECP具有多種酶活性,是其致病因素之一,但大黃魚內(nèi)臟白點(diǎn)病的發(fā)生機(jī)理很復(fù)雜,不局限于ECP的酶活力。
【學(xué)位授予單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S943
【圖文】：

了胞外產(chǎn)物的酶活性及溶血活性，為進(jìn)一步研究該菌的致病機(jī)理，探索更加有效的疾病防治措施提供一定的科學(xué)依據(jù)。圖2-1 大黃魚內(nèi)臟白點(diǎn)病病癥[2]Fig. 2-1 Symptoms of internal organs white-spots disease of P. crocea[2]2.1 實(shí)驗(yàn)材料2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株變形假單胞菌 NZBD11 由本實(shí)驗(yàn)室胡嬌等[2]分離鑒定自患內(nèi)臟白點(diǎn)病的大黃魚病灶部位，于-80 C 保存?zhèn)溆谩?.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑牛血清白蛋白（BSA）、干酪素（酪蛋白，Casein）、考馬斯亮藍(lán) G-250（Brilliant Blue）、脫脂奶粉（Non-fat milk）、可溶性淀粉、吐溫-80、明膠、尿素等均購(gòu)于廈門市泰京生物

位論文 大黃魚源變形假單胞綿羊血細(xì)胞的溶血活性，三個(gè)樣品的溶血價(jià)均接近 1:2，培養(yǎng)響。溫度對(duì) SDS-PAGE 電泳的影響，SDS-PAGE 電泳 12%的壓縮膠顯示，不同培養(yǎng)溫度來(lái)源的變有 20 條左右的蛋白條帶，分布在 10~170 kDa 區(qū)域內(nèi)，顏色深是 10~20 kDa 區(qū)域蛋白條帶分布密集。18 C 的胞外產(chǎn)物顯示了Da 條帶，這是其他兩個(gè)培養(yǎng)溫度來(lái)源的胞外產(chǎn)物所沒(méi)有的；胞外產(chǎn)物中清晰可見，但在 12 C 胞外產(chǎn)物中未出現(xiàn)，且 18 顏色更深。這些都說(shuō)明，培養(yǎng)溫度對(duì)變形假單胞菌的胞外產(chǎn)物

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2760044