【摘要】：熱休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)是一種多功能的細(xì)胞因子。細(xì)胞受到應(yīng)激原的刺激時會在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的HSP70蛋白,HSP70不僅具有分子伴侶的功能,維持細(xì)胞的生存和功能,還參與細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié),在機體免疫中起著重要的作用。熱休克轉(zhuǎn)錄因子(Heat shock transcription factor,HSF)是控制HSP表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。HSF家族共有四個成員,HSF1、HSF2、HSF3和HSF4。其中,HSF1是HSF家族中最重要的成員,主要負(fù)責(zé)熱休克蛋白的表達(dá)調(diào)控,其功能的缺失與許多免疫疾病以及器官發(fā)育有關(guān)。硬骨魚中對HSP70的研究多局限于HSP70 mRNA對免疫刺激的響應(yīng)以及細(xì)胞層面上HSP70蛋白對免疫刺激的響應(yīng)。然而,在體情況下,HSP70蛋白如何響應(yīng)免疫刺激還缺乏相應(yīng)研究。此外,硬骨魚中有關(guān)HSF1及其對HSP70的調(diào)節(jié)的研究也很匱乏。本論文首先驗證了草魚HSP70抗體的特異性,通過免疫組化方法研究發(fā)現(xiàn),嗜水氣單胞桿菌感染24 h的草魚頭腎淋巴細(xì)胞和中腎上皮細(xì)胞中HSP70蛋白表達(dá)均有顯著上調(diào),這種情況一直持續(xù)了72 h;脾臟中HSP70蛋白的表達(dá)在感染24 h后顯著增多,在感染48 h時則與對照組無明顯差異;同時,在肝臟中未能檢測到HSP70蛋白的表達(dá)。這些結(jié)果不僅說明草魚體內(nèi)HSP70能快速參與免疫響應(yīng),而且在不同的器官中對免疫刺激的響應(yīng)有所不同。此外,我們克隆了草魚HSF1的編碼區(qū)序列(Coding sequence,CDS)和HSP70啟動子序列。草魚HSF1序列全長1590 bp,共編碼529個氨基酸。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),草魚HSF1具有完整的DNA結(jié)合域、C端激活域和3個疏水區(qū)域。HSP70啟動子序列含有5個熱休克元件(Heat shock element,HSE)。結(jié)果表明,LPS誘導(dǎo)下,過表達(dá)HSF1能夠顯著上調(diào)HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)以及HSP70啟動子的活性。有意思的是,在沒有免疫刺激的情況下,僅過表達(dá)HSF1就能促進(jìn)HSP70基因和蛋白的表達(dá),這與哺乳動物中相關(guān)研究有所不同,顯示出硬骨魚中HSF1對HSP70的轉(zhuǎn)錄調(diào)控具有特異性。該研究初步探索了炎癥情況下草魚不同組織中HSP70的表達(dá)分布情況,并發(fā)現(xiàn)HSF1可直接參與HSP70的表達(dá)調(diào)控,為未來進(jìn)一步闡明HSP70和HSF1的免疫功能提供了依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S943

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8 戴聰`

本文編號：2750018