【摘要】：魚類性別的可塑性很強(qiáng),極易受體內(nèi)雌、雄激素的影響。已有研究表明雌激素在魚類性別分化中起著重要作用,無(wú)論魚由雌轉(zhuǎn)雄還是由雄轉(zhuǎn)雌的性逆轉(zhuǎn)過(guò)程,都伴隨著雌激素水平的下調(diào)或者上調(diào)。在魚類性別分化關(guān)鍵時(shí)期,雌激素在魚體內(nèi)的合成早于雄激素的合成,那么與之適應(yīng)的,性腺中催化雌激素合成酶(芳香化酶)的表達(dá)也早于催化雄激素合成酶的表達(dá)。如尼羅羅非魚的性別決定受遺傳和溫度的雙重控制,被稱為遺傳性別決定和溫度性別決定的混合型。盡管已有研究報(bào)道在尼羅羅非魚性別分化關(guān)鍵時(shí)期,通過(guò)高溫(36℃)誘導(dǎo)雌魚性逆轉(zhuǎn)為雄魚,在此過(guò)程中伴隨著體內(nèi)雌激素濃度的下降和雌激素合成酶基因Cyp19a1a表達(dá)的下調(diào)。但是通過(guò)添加外源雌激素和高溫共同處理雌魚,能否改變體內(nèi)激素水平和Cyp19a1a表達(dá)水平,以及對(duì)性別比例產(chǎn)生怎樣的影響,目前還不清楚。本試驗(yàn)擬在尼羅羅非魚性腺分化時(shí)期,通過(guò)濃度梯度的外源雌激素和高溫同時(shí)處理尼羅羅非魚雌魚,比較分析處理組之間性類固醇激素水平和群體雌性率,篩選出本試驗(yàn)中外源雌激素補(bǔ)償濃度。并分析該最適補(bǔ)償濃度的外源雌激素與高溫共同處理對(duì)尼羅羅非魚早期性腺中雌激素合成相關(guān)基因(Cyp19a1a)表達(dá)的影響。本研究中,利用野生雌魚與偽雄魚自然產(chǎn)卵受精,獲得3個(gè)尼羅羅非魚全雌家系。分別設(shè)置雌魚對(duì)照組,雄魚對(duì)照組,高溫(36℃)處理組和不同濃度的雌二醇(E2)補(bǔ)償組(高溫和E2共處理),對(duì)比分析各處理組在性別分化早期性腺中E2和11-KT水平。結(jié)果顯示,在13dpf,尼羅羅非魚性腺中的E2水平在XX+HT+E:(16、64)組較對(duì)照組顯著升高,在其余處理組中沒(méi)有顯著性差異。在21dpf,雄魚性腺內(nèi)E2水平顯著低于雌魚,同時(shí)高溫處理組也顯著降低了性腺中E2水平,降低到對(duì)照雌魚性腺中E2水平的一半,但是在XX+HT+E:4組的E2水平卻接近于對(duì)照雌魚。E2補(bǔ)償組隨著添加外源E2濃度的升高其性腺中E2水平也隨之升高。在尼羅羅非魚性別分化早期(13dpf和21dpf)性腺中11-KT水平較低,且未發(fā)生改變。通過(guò)比較分析各處理組在性腺成熟后的群體雄性率發(fā)現(xiàn),在XX+HT+E:4組中,4μg/L的E2處理升高了高溫處理組下降的39.7%雌性率,并且其雌性率與雌魚對(duì)照組接近,在各處理組的E2水平和雌性率對(duì)比分析表明,在本試驗(yàn)中雌激素補(bǔ)償組中最適E2補(bǔ)償濃度為4μg/L,且在尼羅羅非魚早期性腺中的雌激素水平對(duì)其性別分化具有關(guān)鍵性作用。與之適應(yīng),最適E2補(bǔ)償與高溫處理對(duì)尼羅羅非魚早期性腺中雌激素合成相關(guān)基因會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響?在尼羅羅非魚性別分化過(guò)程中,性腺芳香化酶Cyp19a1a是催化其體內(nèi)雌激素合成的關(guān)鍵限速酶。本實(shí)驗(yàn)中,在尼羅羅非魚性別分化早期,使用qRT-PCR和原位雜交(ISH)對(duì)性腺芳香化酶Cyp19a1a表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)與分析。結(jié)果顯示,與雌魚對(duì)照組相比,高溫處理組顯著下調(diào)了尼羅羅非魚性腺芳香化酶Cyp19a1a表達(dá)水平。而最適E2補(bǔ)償組性腺芳香化酶Cyp19a1a表達(dá)水平又恢復(fù)到與雌魚對(duì)照組相近的水平,即最適E2處理與高溫誘導(dǎo)對(duì)性腺芳香化酶Cyp19a1a表達(dá)有著同等效力卻相反的結(jié)果。綜上所述,本研究初步證明,在尼羅羅非魚性別分化關(guān)鍵時(shí)期,高溫誘導(dǎo)尼羅羅非魚雌魚性逆轉(zhuǎn)與魚體內(nèi)的雌激素濃度的下降相關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

測(cè) 13dpf 時(shí)體內(nèi) E2 水平，XX：雌魚對(duì)照；XY:雄魚對(duì)照；XX+HT ：在 9dpf4，XX+HT +E:16:，XX+HT +E:64 分別代表在 9dpf 時(shí)，尼羅羅非魚在 Estradiol和高溫共處理 12 天。數(shù)據(jù)平均值±SE 表示，不同的字母代表不同處理之間顯受精后天數(shù)。ted E2 levels in vivo at 13dpf, XX: female control; XY: male control; XX+HT: highfor 12 days; XX+HT +E: 4, XX+HT +E :16:, XX+HT +E:64 represents that Nile tiltrations of Estradiol (4μg/L, 16μg/L, μg/L) and high temperature for 12 days at 9dperent letters represent significant differences between different treatments (p < 0.05)days after fertilization. 11-KT 的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，13dpf 時(shí)，六組魚體內(nèi) 11-KT 濃度皆很添加外源雌激素可提高體內(nèi)雌激素水平，并且隨添加濃度水平無(wú)影響（圖 2）。

測(cè) 13dpf 時(shí)體內(nèi) 11-kt 水平，XX：雌魚對(duì)照；XY:雄魚對(duì)照；XX+HT ：在 9T +E:4，XX+HT +E:16:，XX+HT +E:64 分別代表在 9dpf 時(shí)，尼羅羅非魚在 E（4μg/L，16μg/L，μg/L）浸浴和高溫共處理 12 天。dpf，受精后天數(shù)。ed 11-kt levels in vivo at 13 dpf, XX: female control; XY: male control; XX + HT: ht 12 dpf for 12 days; XX + HT + E: 4, XX + HT +E:16:, XX+HT +E:64 represents terent concentrations of Estradiol (4μg/L, 16μg/L, μg/L) and high temperature for 12number of days after fertilization. 21dpf 尼羅羅非魚仔魚性腺中 E2 和 11-kt 水平比XY 組體內(nèi) E2 水平顯著低于 XX 對(duì)照組，且 XX+HT 組體照組，高溫和添加外源雌激素處理組魚體內(nèi) E2 水平顯著高+E:4 組魚組體內(nèi) E2 水平與 XX 對(duì)照組差異不顯著，X 組 E2 水平隨添加外源雌激素濃度升高而升高，顯

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2732323