日本鏡蛤(Dosinorbis japonica)數(shù)量性狀、營(yíng)養(yǎng)成分及幼體生態(tài)學(xué)研究
【學(xué)位授予單位】:大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類(lèi)號(hào)】:S917.4
【圖文】:
和ITS1-R5'→ACACGAGCCGAGTGATCCACPCR擴(kuò)增了線粒體 CO1 基因的 3'端709 bp的序列。PCR反應(yīng)體系為50 uL,每個(gè)反應(yīng)體系內(nèi)含:模版DNA(50 ng2uL,20 mmol/dm3Mg2+的 10×buffer 5.0 uL,dNTP(10 mmol/dm3) 1.0 uL,(BBI)0.4 uL,primer F 1.0 uL,primer R1.0 uL,Template 1.0 uL,加 ddH50 uL;PCR 反應(yīng)在 Eppendorf 的熱循環(huán)儀上進(jìn)行,反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)min,然后進(jìn)行 35 個(gè)循環(huán),每個(gè)循環(huán)包括 94 ℃變性 40 s;52 ℃退火 30 s,延伸 60 s。最后 72 ℃充分延伸 7 min,PCR 產(chǎn)物用 1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行挑選較為好的 PCR 產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行單向測(cè)測(cè)。2.2 序列比對(duì)將得到的 DNA 序列輸入到 BLAST 頁(yè)面(https://blast.ncbi.nlm.nih.govcgi)進(jìn)行物種對(duì)比,之后得到相應(yīng)的結(jié)果,利用 MEGA5 進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建方法2.3 結(jié)果2.3.1 傳統(tǒng)分類(lèi)法(形態(tài)學(xué)鑒定)
和ITS1-R5'→ACACGAGCCGAGTGATCCACPCR擴(kuò)增了線粒體 CO1 基因的 3'端709 bp的序列。PCR反應(yīng)體系為50 uL,每個(gè)反應(yīng)體系內(nèi)含:模版DNA(50 ng2uL,20 mmol/dm3Mg2+的 10×buffer 5.0 uL,dNTP(10 mmol/dm3) 1.0 uL,(BBI)0.4 uL,primer F 1.0 uL,primer R1.0 uL,Template 1.0 uL,加 ddH50 uL;PCR 反應(yīng)在 Eppendorf 的熱循環(huán)儀上進(jìn)行,反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)min,然后進(jìn)行 35 個(gè)循環(huán),每個(gè)循環(huán)包括 94 ℃變性 40 s;52 ℃退火 30 s,延伸 60 s。最后 72 ℃充分延伸 7 min,PCR 產(chǎn)物用 1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行挑選較為好的 PCR 產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行單向測(cè)測(cè)。2.2 序列比對(duì)將得到的 DNA 序列輸入到 BLAST 頁(yè)面(https://blast.ncbi.nlm.nih.govcgi)進(jìn)行物種對(duì)比,之后得到相應(yīng)的結(jié)果,利用 MEGA5 進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建方法2.3 結(jié)果2.3.1 傳統(tǒng)分類(lèi)法(形態(tài)學(xué)鑒定)
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):2730775
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