【摘要】：傳染性造血器官壞死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)和傳染性胰腺壞死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)分別是傳染性造血器官壞死病和傳染性胰腺壞死病的病原。這兩種病毒主要感染鮭、鱒魚類,引發(fā)相應臨床疾病并導致魚類極高的死亡率,給鮭、鱒魚水產養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經濟損失。盡管針對IHNV和IPNV的疫苗已在許多國家商業(yè)化,但在現(xiàn)代水產養(yǎng)殖中,IHNV和IPNV的流行仍然很普遍。本研究通過RT-PCR方法克隆了IHNV-N基因,構建了pTriEx-N重組表達載體。將重組表達載體pTriEx-N與桿狀病毒線性化的Bacmid DNA共轉染Sf9細胞收獲重組病毒,然后利用桿狀病毒表達載體系統(tǒng)表達并分離純化了IHNV-N目的蛋白。同時我們通過重疊PCR的方法從頭合成了IPNV-VP2基因,構建了pTriEx-VP2重組表達載體,然后經過大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達并分離純化得到所需的IPNV-VP2目的蛋白。我們將純化的IHNV-N蛋白和IPNV-VP2蛋白分別注射免疫家兔,制備了抗血清。血清效價檢測結果顯示,IHNV-N蛋白抗血清稀釋度達到1/1000時,其OD_(450)值仍大于陰性血清數(shù)值的2.1倍以上,可認定為陽性;而IPNV-VP2蛋白抗血清稀釋度達到1/2000時,其OD_(450)值仍大于陰性血清數(shù)值的2.1倍以上,可認定為陽性。兩種抗血清之間無交叉性反應,表明特異性良好。組織樣品檢測結果顯示,制備的IHNV-N抗血清可以用于IHNV感染虹鱒的快速檢測。本研究制備的高效價的抗血清為IHN及IPN病毒感染提供了免疫學檢測試劑,同時為鮭、鱒魚病毒疫情的監(jiān)測及有效防控奠定了基礎。
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S941.414

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1 梁磊;IHNV-N蛋白和IPNV-VP2蛋白抗血清的制備與應用[D];西北農林科技大學;2019年

本文編號：2726449