【摘要】：仿刺參(Apostichopus japonicus),屬于棘皮動物門,海參綱,刺參科,仿刺參屬,是一種重要的海洋經(jīng)濟(jì)棘皮動物。仿刺參在遇到敵害或不利的環(huán)境條件(高鹽度脅迫,不存在氧等)時(shí),發(fā)生吐臟現(xiàn)象;當(dāng)恢復(fù)到適宜環(huán)境時(shí),即可再生新的器官。本文采用組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、免疫熒光、Western blot等方法對仿刺參腸再生過程中的腸干細(xì)胞進(jìn)行了標(biāo)記,腸再生過程中一些胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白的表達(dá)等。免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在腸再生過程中CD44蛋白在整個(gè)腸再生組織中均有表達(dá);MSI1蛋白在整個(gè)腸再生組織中也有表達(dá),即可證明這兩種蛋白可以作為干細(xì)胞標(biāo)記物用作仿刺參腸干細(xì)胞的鑒定。組織學(xué)結(jié)果顯示仿刺參腸再生第3天,腸系膜邊緣增厚。再生第6天,腸系膜的進(jìn)一步增厚,形成原基。再生第9天,新生腸道進(jìn)一步發(fā)育,開始形成腸管并開始形成皺褶。再生第12天,腸系膜增厚成消化道的腸壁,再生的新腸管基本形成。再生第15天,消化道逐漸具備基礎(chǔ)功能,結(jié)構(gòu)重新建立,腸上皮層由之前的多層的立型細(xì)胞慢慢分化成單層的柱狀型,肌肉層開始形成。再生第18天,消化道具備了消化功能,肌肉層形成縱肌層和Qg肌層。再生第21天,消化道幾乎達(dá)到正常水平。免疫組化結(jié)果證明在腸再生的過程中和成體仿刺參中,β-catenin都有表達(dá)。再生的第3-6天,β-catenin主要表達(dá)在腸系膜邊緣。再生第9天,β-catenin在腸壁和腸管上表達(dá)比較多。再生第12天,β-catenin表達(dá)最多,主要集中在再生的腸管上。再生第15-18天,β-catenin隨著再生表達(dá)越來越少,肌肉層中幾乎不表達(dá)。再生第21天,β-catenin的表達(dá)部位幾乎與成體仿刺參相同。免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在腸再生過程中Wnt6蛋白在整個(gè)腸再生以及成體腸組織中均有表達(dá)。首先Wnt6蛋白在正常的腸組織中均有表達(dá)。在仿刺參腸再生的過程中,Wnt6蛋白的表達(dá)量開始先增高,然后表達(dá)量隨著再生的進(jìn)行逐漸下降。在再生的第9-12天,其表達(dá)量與正常狀態(tài)相比最高。第15-21天,Wnt6蛋白表達(dá)量逐漸降低,成體仿刺參的Wnt6表達(dá)量最低。Western blot檢測結(jié)果顯示,Wnt6蛋白在腸再生過程中表達(dá)量先遞增后遞減,在再生第9天表達(dá)量最高。β-catenin蛋白在仿刺參腸再生過程中表達(dá)量也是先遞增后遞減,但與Wnt6蛋白有一定的時(shí)間差,在腸再生第12天表達(dá)量最高,再生第21天是已經(jīng)接近一般水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CD44蛋白和MSI1蛋白進(jìn)一步被證明可以作為腸干細(xì)胞標(biāo)記物用于對腸干細(xì)胞的鑒定;吐腸后,腸干細(xì)胞可能來源于腸系膜邊緣;通過包卷的方式形成新的腸道;Wnt信號通路在腸再生過程中起著重要的調(diào)控作用,其中通路中的Wnt6蛋白和β-catenin蛋白在腸再生組織中皆有表達(dá),相繼調(diào)控腸組織再生的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 3.1 仿刺參吐臟Fig.3.1 Evisceration phenomenon of the sea cucumber第 3 天，我們可以觀察到體腔內(nèi)腸系膜邊緣發(fā)生增厚（圖系膜進(jìn)一步的變厚，形成消化道的腸壁，形成纖細(xì)的管狀天，腸道又進(jìn)一步發(fā)育，依舊很短很細(xì)，食道和泄殖腔兩腔，開始形成腸管（圖 3.2 C）。在再生的第 12 天，我們，但還沒有明顯的界限（圖 3.2 D）。在再生第 15 天，這具有了典型的消化道結(jié)構(gòu)（圖 3.2 E）。在再生第 18 天,我食物殘?jiān)f明在這個(gè)階段，消化道已經(jīng)具備了一定的消化，消化道的再生水平幾乎達(dá)到正常水平（圖 3.2 G），除有觀察到其他變化（圖 3.2 H）。

圖 3.2 仿刺參吐臟再生Fig.3.2 Different intestinal regeneration stages of Apostichopus japonicas1） A. 仿刺參腸再生第 3 天 B. 仿刺參腸再生第 6 天 C. 仿刺參腸再生第 9 天 D. 仿刺參腸再生第12天 E. 仿刺參腸再生第15天 F. 仿刺參腸再生第18天 G. 仿刺參腸再生第21天 H.成體仿刺參腸組織2） A. The 3th day of Apostichopus japonicas intestinal regeneration B. The 6th day of Apostichopusjaponicas intestinal regeneration C. The 9th day of Apostichopus japonicas intestinal regeneration D.The 12th day of Apostichopus japonicas intestinal regeneration E. The 15th day of Apostichopusjaponicas intestinal regeneration F. The 18th day of Apostichopus japonicas intestinal regeneration G.The 21th day of Apostichopus japonicas intestinal regeneration H. adult Apostichopus japonicusintestinal tissue3.1.2 組織學(xué)為了了解在再生過程中的組織學(xué)水平發(fā)生的結(jié)構(gòu)變化，我們通過 HE 染色方法分析了仿刺參腸再生的細(xì)胞組織變化。再生的第 3 天，我們可以觀察到腸系膜邊緣發(fā)生不規(guī)則的增厚（圖 3.3 A）。再生的第 6 天，伴隨著腸系膜更進(jìn)一步的增厚，形成原基（圖 3.3 B）。再生第 9 天，新生

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本文編號：2725067