【摘要】：副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一種革蘭氏陰性,是一種最常見的食源性病致病菌,廣泛分布在海洋環(huán)境中。逐年遞增的食品安全事件表明副溶血性弧菌目前已經(jīng)成為水產(chǎn)品質(zhì)量的最大威脅,所以,研究副溶血性弧菌預測模型及其生長行為對食源性致病菌株的風險評估以及水產(chǎn)品(蝦)的貨架期具有實際意義。本研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下:1.脅迫溫度下兩株高致病性副溶血弧菌的生長差異比較分析。為比較脅迫溫度下高致病性副溶血性弧菌的生長差異,本研究選用致病性副溶血性弧菌ATCC 33847(tlh+/tdh+/trh-)和F 18(tlh+/tdh+/trh-),測定其在南美白對蝦上4~30℃的生長情況,采用修正一級模型擬合其生長曲線,并基于最優(yōu)模型擬合得到的最大比生長速率(μmax)、延滯期(LT)比較分析兩株菌的生長特性。結(jié)果表明,20~30℃時,兩株副溶血性弧菌并未呈現(xiàn)出明顯生長差異,而4~15℃時的生長差異較大。修正Gompertz模型為ATCC 33847和F 18在15~30℃的生長曲線的最優(yōu)模型(R20.99),Baranyi模型為ATCC 33847在4~7℃以及F 18在7℃下最優(yōu)模型(R20.935),而F 18在4℃和10℃的生長模型有待于進一步研究。15~30℃,F 18的μmax大于ATCC 33847,差值約從0.2增至0.8 Log10(cfu/m L)/h,ATCC 33847的LT大于F 18,差值從2.5 h變化到7 h。比較其他同類文獻的μmax二級模型發(fā)現(xiàn)高致病性菌株存在顯著性生長差異(P0.05),且差值隨著溫度的升高而變大。因此,脅迫溫度下相同致病性副溶血性弧菌的生長存在較大的異質(zhì)性,而結(jié)合微生物實際生活環(huán)境,建議考慮建立以混合菌株為研究對象的預測模型,為風險評估提供更準確的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。2.致病性與非致病性副溶血性弧菌在南美白對蝦上混合培養(yǎng)的生長行為致病性副溶血性弧菌,一個重要的食源性致病菌,在環(huán)境中與非致病性副溶血性弧菌株共存。然而,目前的副溶血性弧菌預測模型的研究通常專注于單一菌株,從不考慮致病性和非致病性細菌共存的局面。在本研究中,對四株副溶血性弧菌菌株(F18:tlh+/trh+/tdh-,ATCC17802:tlh+/trh+/tdh-,F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)等量混合后,在不同溫度下(4,7,10,15,20,25和30℃)在即食南美白對蝦中的生長行為進行了研究,細菌總數(shù)由微生物傳統(tǒng)平板計數(shù)法得到。結(jié)果表明副溶血性弧菌混合菌株及其四個單菌株在15℃~30℃時呈現(xiàn)生長狀態(tài),在4℃~7℃時呈現(xiàn)死亡狀態(tài)。而在10℃時,副溶血性弧菌混合菌株在初始100h是死亡狀態(tài),之后菌含量迅速增長,但是對于單一菌株,只有一個單菌株F18顯示類似的生長趨勢,而其他菌株一直是緩慢增長狀態(tài)。與單菌株相比,混合菌株具有較高的最大生長速率和更短的延滯期,即具有更好的生存能力。上述結(jié)果表明,使用副溶血性弧菌菌株混合菌株建立的微生物預測模型,可能更加貼切細菌真實的生活環(huán)境,而這項研究也將為微生物預測模型的研究提供一個新的思路。3.PMA多重熒光定量PCR技術(shù)探究即食蝦中不同基因型副溶血性弧菌在混合培養(yǎng)中的生長行為本研究成功構(gòu)建了一種PMA多重熒光PCR方法,同時定量檢測不同基因型副溶血性弧菌(F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)在即食南美白對蝦中的生長行為,并運用Baranyi模型擬合10℃時不同基因性副溶血性弧菌在即食蝦中的生長數(shù)據(jù)。結(jié)果表明10℃時不同基因型副溶血性弧菌混合菌株在即食蝦上呈現(xiàn)生長狀態(tài),ATCC33847的最大比生長速率(μmax)為3.559±0.666 Log(CFU/m L)/d,F36的是2.999±0.415 Log(CFU/m L)/d;ATCC33847的延滯期(LT)為2.778±0.138d;F36的是2.826±0.146d。這表明混合菌株中致病性菌株在即食蝦上比非致病性菌株生長能力要好。這一結(jié)果為研究副溶血性弧菌混合菌株的生長行為提供了有效的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S945.49
【圖文】：

30℃條件下副溶血性弧菌混合菌株及其單菌株在即食values of μmaxof four V. parahemolyticus strains and their shrimp from 15 -30oC.示，副溶血性弧菌混合菌株及其單菌株在 15℃著溫度變化的關(guān)系曲線。所測溫度對不同單菌株不同菌株之間的 CV 值不盡相同，但是都超過條件對致病性和非致病性副溶血性弧菌的影響 CV 值相比，在 15℃~30℃條件下，混合菌株的 0.2。據(jù)現(xiàn)有的調(diào)查與研究表明，溫度變化對副V 值具有直接影響，相對于最佳生長條件，單菌強的應變能力[58,83,107]，這也表明，目前調(diào)查研有可能低估了副溶血性弧菌的風險值，而未來基確性以及參考價值更高，至少由于 CV 值得不穩(wěn)有待于進一步完善。下的失活行為

Taq DNA 聚合酶 0.2010μM primer 0.5 10μM probe 0.20DNA 模板 1.0 ddH2O 12.5多重 Real-time PCR 的反應條件：本研究多重 Real-time PCR 擴增條件如圖4-1 所示。在 7500 Fast Real-time PCR system 中進行擴增實驗，并使用 7500Software v2.0.6 軟件分析相關(guān)數(shù)據(jù)，該軟件在 Applied Biosystems 公司的官方網(wǎng)站上下載。圖 4-1 多重 Real-time PCR 的反應條件Fig.4-1 The reaction condition used for multiple Real-time PCR2.6 PMA 多重 Real-time PCR 標準曲線的構(gòu)建本實驗構(gòu)建標準曲線時，采用人工接種的蝦樣。具體的實驗操作如下：解凍

【引證文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 徐馬俊坤;混合培養(yǎng)中致病性及非致病性副溶血性弧菌的比例變化研究[D];上海海洋大學;2017年

本文編號：2724290