發(fā)布時(shí)間：2020-06-21 15:47

【摘要】：達(dá)氏鰉自然種群是生活于我國(guó)黑龍江及其流域的冷水性淡水魚(yú),屬于鱘科魚(yú)類,其個(gè)體大,抗病力強(qiáng),性成熟晚,養(yǎng)殖目的主要是獲取魚(yú)子醬。目前,達(dá)氏鰉養(yǎng)殖群體已從寒冷的黑龍江南移至北京、河北、湖北、四川、重慶、云南等地,養(yǎng)殖溫度逐漸升高,運(yùn)輸頻率逐漸變大,達(dá)氏鰉面臨著越來(lái)越嚴(yán)峻的生存考驗(yàn)。熱休克蛋白(HSP)是生物體中重要的應(yīng)激蛋白,它對(duì)保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面有突出的作用。本文的主要目的是研究熱休克蛋白在幫助達(dá)氏鰉應(yīng)對(duì)嚴(yán)峻環(huán)境挑戰(zhàn)時(shí)做出的調(diào)控方式,以期為達(dá)氏鰉在養(yǎng)殖和運(yùn)輸方面提供理論支持,旨在為保護(hù)達(dá)氏鰉人工種群提供理論依據(jù)。本文采用同源克隆法和末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆了達(dá)氏鰉HSP70和HSP90基因全長(zhǎng)序列,并設(shè)計(jì)5個(gè)溫度梯度(4℃、10℃、16℃、25℃、28℃)和5個(gè)鹽度梯度(0ppt、10ppt、20ppt、30ppt、40ppt)的條件對(duì)達(dá)氏鰉進(jìn)行處理,以溫度16℃鹽度0ppt作為對(duì)照,做組織表達(dá)差異分析,同時(shí)取肌肉、鰓絲和肝臟作為樣品做熒光定量分析。試驗(yàn)結(jié)果得出,達(dá)氏鰉HSP70基因(Genbank登錄號(hào):KP050541)序列全長(zhǎng)為2275bp,包括5′非編碼區(qū)85個(gè)核苷酸,3′非編碼區(qū)237個(gè)核苷酸和開(kāi)放閱讀框(ORF)1953個(gè)核苷酸。通過(guò)分析氨基酸序列發(fā)現(xiàn),達(dá)氏鰉HSP70基因編碼氨基酸650個(gè),分子量71.13KD,理論等電點(diǎn)5.215,含有HSP70家族的3個(gè)標(biāo)簽序列,分別位于氨基酸序列的9-16(IDLGTTYS),197-210(IFDLGGGTFDVSIL)和334-348(IVLVGGSTRIPKIQK)上。達(dá)氏鰉HSP90基因(Genbank登錄號(hào):KP050542)序列全長(zhǎng)2718bp,包括5′非編碼區(qū)44bp,3′非編碼區(qū)497bp和開(kāi)放閱讀框(ORF)2178bp。通過(guò)分析氨基酸序列發(fā)現(xiàn),達(dá)氏鰉HSP90編碼725個(gè)氨基酸,分子量83.62KD,其理論等電點(diǎn)4.846。該蛋白含有HSP90家族的1個(gè)標(biāo)簽序列,位于氨基酸序列的32-41(YSNKEIFLRE)上。達(dá)氏鰉熱休克蛋白組織表達(dá)分析顯示,HSP70和HSP90在達(dá)氏鰉的11種組織中都有表達(dá),包括肌肉、鰓絲、腦、須、心臟、肝臟、脾臟、胃、腸道、

本文編號(hào)：2724280