發(fā)布時間：2020-06-21 15:47

【摘要】：達氏鰉自然種群是生活于我國黑龍江及其流域的冷水性淡水魚,屬于鱘科魚類,其個體大,抗病力強,性成熟晚,養(yǎng)殖目的主要是獲取魚子醬。目前,達氏鰉養(yǎng)殖群體已從寒冷的黑龍江南移至北京、河北、湖北、四川、重慶、云南等地,養(yǎng)殖溫度逐漸升高,運輸頻率逐漸變大,達氏鰉面臨著越來越嚴(yán)峻的生存考驗。熱休克蛋白(HSP)是生物體中重要的應(yīng)激蛋白,它對保持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面有突出的作用。本文的主要目的是研究熱休克蛋白在幫助達氏鰉應(yīng)對嚴(yán)峻環(huán)境挑戰(zhàn)時做出的調(diào)控方式,以期為達氏鰉在養(yǎng)殖和運輸方面提供理論支持,旨在為保護達氏鰉人工種群提供理論依據(jù)。本文采用同源克隆法和末端快速擴增(RACE)技術(shù)克隆了達氏鰉HSP70和HSP90基因全長序列,并設(shè)計5個溫度梯度(4℃、10℃、16℃、25℃、28℃)和5個鹽度梯度(0ppt、10ppt、20ppt、30ppt、40ppt)的條件對達氏鰉進行處理,以溫度16℃鹽度0ppt作為對照,做組織表達差異分析,同時取肌肉、鰓絲和肝臟作為樣品做熒光定量分析。試驗結(jié)果得出,達氏鰉HSP70基因(Genbank登錄號:KP050541)序列全長為2275bp,包括5′非編碼區(qū)85個核苷酸,3′非編碼區(qū)237個核苷酸和開放閱讀框(ORF)1953個核苷酸。通過分析氨基酸序列發(fā)現(xiàn),達氏鰉HSP70基因編碼氨基酸650個,分子量71.13KD,理論等電點5.215,含有HSP70家族的3個標(biāo)簽序列,分別位于氨基酸序列的9-16(IDLGTTYS),197-210(IFDLGGGTFDVSIL)和334-348(IVLVGGSTRIPKIQK)上。達氏鰉HSP90基因(Genbank登錄號:KP050542)序列全長2718bp,包括5′非編碼區(qū)44bp,3′非編碼區(qū)497bp和開放閱讀框(ORF)2178bp。通過分析氨基酸序列發(fā)現(xiàn),達氏鰉HSP90編碼725個氨基酸,分子量83.62KD,其理論等電點4.846。該蛋白含有HSP90家族的1個標(biāo)簽序列,位于氨基酸序列的32-41(YSNKEIFLRE)上。達氏鰉熱休克蛋白組織表達分析顯示,HSP70和HSP90在達氏鰉的11種組織中都有表達,包括肌肉、鰓絲、腦、須、心臟、肝臟、脾臟、胃、腸道、

本文編號：2724280