【摘要】：視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白受體(RLRs)是—種重要的模式識(shí)別受體(PRR)。RLRs通�？勺R(shí)別胞質(zhì)內(nèi)病毒的RNA,從而激活其下游的干擾素表達(dá)途徑,在先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。目前,RLRs家族包括RIG-I、MDA5和LGP2三個(gè)成員。本研究克隆了斑馬魚(Danio rerio)LGP2基因兩個(gè)剪切異構(gòu)體,分別命名為Dr LGP2a和Dr LGP2b;用烏鱧水泡病毒(SHVV)感染斑馬魚胚胎成纖維細(xì)胞ZF4,研究病毒感染和RLRs途徑的關(guān)系。主要結(jié)果如下:1.克隆并測定了Dr LGP2a和Dr LGP2b全長c DNA序列,其在NCBI數(shù)據(jù)庫的登錄號(hào)分別是KP341002和KP341003。Dr LGP2a基因c DNA全長2473 bp,其中5’UTR為50 bp,3’UTR 383 bp,開放閱讀框(ORF)為2040 bp,編碼679 aa。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測表明Dr LGP2a包含一個(gè)ATP依賴的DEXDc結(jié)構(gòu)域,一個(gè)RNA解旋酶HELICc結(jié)構(gòu)域和一個(gè)調(diào)控結(jié)構(gòu)域(RD)。Dr LGP2b是Dr LGP2a的剪切異構(gòu)體,二者都有DEXDc結(jié)構(gòu)域和HELICc結(jié)構(gòu)域,但Dr LGP2b缺乏RD結(jié)構(gòu)域。2.研究SHVV對(duì)斑馬魚ZF4細(xì)胞的感染特性:病毒N蛋白和G蛋白的m RNA和c RNA在SHVV感染后3小時(shí)表達(dá)量顯著增加,6小時(shí)到24小時(shí)逐漸減少;干擾素IFN-αm RNA表達(dá)量在病毒感染后6小時(shí)顯著升高,在12小時(shí)達(dá)到峰值;干擾素誘導(dǎo)相關(guān)基因Mx的m RNA表達(dá)量在病毒感染后6小時(shí)顯著升高,在24小時(shí)達(dá)到峰值;RIG-I、MDA5和LGP2 m RNA的表達(dá)在病毒感染后3小時(shí)顯著增加,6小時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高。這些結(jié)果表明SHVV感染ZF4細(xì)胞可能激活了RLRs介導(dǎo)的干擾素表達(dá)途徑。為了確認(rèn)RLRs-IFN信號(hào)途徑的激活和病毒感染有關(guān),使用SHVV感染和不感染的ZF4細(xì)胞總RNA轉(zhuǎn)染ZF4細(xì)胞,結(jié)果表明只有SHVV感染3個(gè)小時(shí)的ZF4細(xì)胞總RNA才能誘導(dǎo)IFN-α的顯著表達(dá),表明SHVV病毒復(fù)制中間體可能參與RLRs-IFN途徑的激活。3.采用制備的Dr LGP2-DEXDc多克隆抗體,對(duì)病毒感染ZF4細(xì)胞LGP2兩種異構(gòu)體進(jìn)行Western blot檢測。結(jié)果表明Dr LGP2a的表達(dá)量是Dr LGP2b的十倍左右。Dr LGP2a的表達(dá)量在病毒感染ZF4細(xì)胞12小時(shí)的時(shí)候顯著升高,表明兩種LGP2異構(gòu)體可能在RLRs-IFN途徑中起到不同的作用。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S943
【圖文】：

圖 1 RLR 識(shí)別病毒的信號(hào)途徑（Moresco and Beutler 2010）Fig.1 Virus recognition by the RLR signaling pathways.2 干擾素的抗病毒途徑機(jī)體的免疫系統(tǒng)是防御病原微生物入侵、監(jiān)測并清除機(jī)體內(nèi)的非正常細(xì)胞、進(jìn)

魚 LGP2 基因部分序列電00 DNA Marker；1:目的ofiles of zebrafish LGP00 DNA Marker; 1: TargetM 1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 江育林,李正秋;病毒感染的草魚細(xì)胞產(chǎn)生類干擾素物質(zhì)的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1991年01期

2 孫輝;蔣爭凡;;抗病毒天然免疫研究[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2013年10期

3 吳玉厚;吳冰潔;周國利;張永忠;傅崇羅;康新江;;干擾素研究進(jìn)展[J];生物學(xué)教學(xué);2007年07期

本文編號(hào)：2716290