【摘要】：視黃酸誘導基因蛋白受體(RLRs)是—種重要的模式識別受體(PRR)。RLRs通常可識別胞質內病毒的RNA,從而激活其下游的干擾素表達途徑,在先天性免疫反應中發(fā)揮著重要作用。目前,RLRs家族包括RIG-I、MDA5和LGP2三個成員。本研究克隆了斑馬魚(Danio rerio)LGP2基因兩個剪切異構體,分別命名為Dr LGP2a和Dr LGP2b;用烏鱧水泡病毒(SHVV)感染斑馬魚胚胎成纖維細胞ZF4,研究病毒感染和RLRs途徑的關系。主要結果如下:1.克隆并測定了Dr LGP2a和Dr LGP2b全長c DNA序列,其在NCBI數(shù)據(jù)庫的登錄號分別是KP341002和KP341003。Dr LGP2a基因c DNA全長2473 bp,其中5’UTR為50 bp,3’UTR 383 bp,開放閱讀框(ORF)為2040 bp,編碼679 aa。蛋白結構預測表明Dr LGP2a包含一個ATP依賴的DEXDc結構域,一個RNA解旋酶HELICc結構域和一個調控結構域(RD)。Dr LGP2b是Dr LGP2a的剪切異構體,二者都有DEXDc結構域和HELICc結構域,但Dr LGP2b缺乏RD結構域。2.研究SHVV對斑馬魚ZF4細胞的感染特性:病毒N蛋白和G蛋白的m RNA和c RNA在SHVV感染后3小時表達量顯著增加,6小時到24小時逐漸減少;干擾素IFN-αm RNA表達量在病毒感染后6小時顯著升高,在12小時達到峰值;干擾素誘導相關基因Mx的m RNA表達量在病毒感染后6小時顯著升高,在24小時達到峰值;RIG-I、MDA5和LGP2 m RNA的表達在病毒感染后3小時顯著增加,6小時表達量達到最高。這些結果表明SHVV感染ZF4細胞可能激活了RLRs介導的干擾素表達途徑。為了確認RLRs-IFN信號途徑的激活和病毒感染有關,使用SHVV感染和不感染的ZF4細胞總RNA轉染ZF4細胞,結果表明只有SHVV感染3個小時的ZF4細胞總RNA才能誘導IFN-α的顯著表達,表明SHVV病毒復制中間體可能參與RLRs-IFN途徑的激活。3.采用制備的Dr LGP2-DEXDc多克隆抗體,對病毒感染ZF4細胞LGP2兩種異構體進行Western blot檢測。結果表明Dr LGP2a的表達量是Dr LGP2b的十倍左右。Dr LGP2a的表達量在病毒感染ZF4細胞12小時的時候顯著升高,表明兩種LGP2異構體可能在RLRs-IFN途徑中起到不同的作用。
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S943
【圖文】：

圖 1 RLR 識別病毒的信號途徑（Moresco and Beutler 2010）Fig.1 Virus recognition by the RLR signaling pathways.2 干擾素的抗病毒途徑機體的免疫系統(tǒng)是防御病原微生物入侵、監(jiān)測并清除機體內的非正常細胞、進

魚 LGP2 基因部分序列電00 DNA Marker；1:目的ofiles of zebrafish LGP00 DNA Marker; 1: TargetM 1

【參考文獻】

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1 江育林,李正秋;病毒感染的草魚細胞產(chǎn)生類干擾素物質的研究[J];病毒學報;1991年01期

2 孫輝;蔣爭凡;;抗病毒天然免疫研究[J];中國科學:生命科學;2013年10期

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本文編號：2716290