【摘要】：斜帶石斑魚(yú)是我國(guó)重要的高檔海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi),高溫脅迫是影響其生長(zhǎng)和成活的關(guān)鍵環(huán)境因素。消化道是斜帶石斑魚(yú)高溫應(yīng)激的主要靶器官之一,而熱休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)在細(xì)胞應(yīng)激損傷修復(fù)和抑制細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮重要功能,能有效保護(hù)機(jī)體抵御應(yīng)激損傷。替普瑞酮作為HSPs誘導(dǎo)劑,其在人類(lèi)、大鼠和畜禽胃腸黏膜損傷的保護(hù)已有相關(guān)研究和應(yīng)用,而至今在水產(chǎn)動(dòng)物中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文通過(guò)拌料投喂不同劑量替普瑞酮分析其對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道組織的影響,為今后斜帶石斑魚(yú)的養(yǎng)殖業(yè)提供理論依據(jù)。研究的內(nèi)容主要包括以下四個(gè)部分:(1)替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的影響通過(guò)拌料投喂,觀察斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的數(shù)據(jù),研究不同劑量的替普瑞酮(100mg/Kg、200 mg/Kg、400 mg/Kg)對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示:與對(duì)照組(0 mg/Kg)相比,低劑量組(100 mg/Kg)和中劑量組(200 mg/Kg)的谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和總膽紅素水平差異不顯著(p0.05),高劑量組(400 mg/Kg)斜帶石斑魚(yú)谷草轉(zhuǎn)氨酶和總膽汁酸的水平升高顯著,達(dá)到411.6±50.1(μmol/L)和24.8±5.1(μmol/L)。結(jié)果表明,低劑量(100 mg/Kg)和中劑量(200 mg/Kg)的替普瑞酮飼料添加量對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)沒(méi)有影響,而高劑量(400 mg/Kg)的替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能有損傷,證明有一定的毒性。(2)替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道熱激誘導(dǎo)損傷保護(hù)的組織學(xué)分析通過(guò)消化道組織切片,觀察了斜帶石斑魚(yú)投喂替普瑞酮以及熱激損傷后的腸道組織學(xué)變化。結(jié)果顯示,處理組石斑魚(yú)腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層的厚度明顯的高于對(duì)照組。替普瑞酮投喂15 d后,各處理組石斑魚(yú)腸道黏膜絨毛長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層的厚度完全不同;低劑量組(100 mg/Kg)對(duì)腸道黏膜絨毛長(zhǎng)度和寬度的生長(zhǎng)穩(wěn)定性好,中劑量組(200 mg/Kg)對(duì)腸道肌肉層的厚度的穩(wěn)定性好。提升水溫8℃進(jìn)行高溫應(yīng)激2 h,應(yīng)激后0 h與48 h對(duì)比,處理組的腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層厚度前后較穩(wěn)定。組織學(xué)觀察顯示,替普瑞酮不僅能夠促進(jìn)腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層厚度的生長(zhǎng),還能夠維持腸道組織學(xué)生長(zhǎng)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明,中劑量組(200 mg/Kg)替普瑞酮對(duì)于腸道絨毛和肌肉層穩(wěn)定性效果最好。(3)替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道的HSPs熱激誘導(dǎo)效應(yīng)通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定結(jié)果觀察,發(fā)現(xiàn)添加不同劑量的替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道的HSPs的熱激誘導(dǎo)效應(yīng)明顯。結(jié)果顯示,高溫應(yīng)激后0 h和48 h,處理組誘導(dǎo)的HSP70、HSP60和HSP90的表達(dá)明顯的高于對(duì)照組。HSP70表達(dá)的水平在160ng/L左右,HSP60在25ng/L左右,HSP90在14ng/L左右,可見(jiàn)HSP70的熱激水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)的高于HSP60的熱激水平和HSP90的熱激水平;胃中的HSPs表達(dá)水平高于腸道。結(jié)果表明,替普瑞酮能夠提高魚(yú)體消化道HSP 70的表達(dá),而較高的初始表達(dá)水平可提高隨后熱應(yīng)激的抵御能力,表現(xiàn)為對(duì)熱激的敏感性降低;且熱激恢復(fù)后各處理組HSPs仍維持高表達(dá)水平。(4)替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道相關(guān)免疫指標(biāo)的影響通過(guò)免疫酶活力的觀察,發(fā)現(xiàn)添加替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道免疫酶活力有顯著的影響。金屬硫蛋白呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì),6 h最低,低劑量組(100 mg/Kg)下降較緩慢。細(xì)胞色素C水平呈現(xiàn)先高后低的趨勢(shì),而且峰值以6 h為主,與金屬硫蛋白的變化水平相反,這可能是抑制金屬硫蛋白降低的原因之一。HSP70、HSP60和HSP90的最高值主要在6 h達(dá)到最高,細(xì)胞色素C的峰值也是以6 h為主,因細(xì)胞色素C在呼吸電子傳遞鏈中有不可或缺的作用,然而細(xì)胞色素C相對(duì)于其它蛋白來(lái)說(shuō)更易變異,導(dǎo)致生物體的電子傳遞出現(xiàn)問(wèn)題而凋亡,HSPs在一定程度上緩解了這種凋亡的產(chǎn)生。低劑量替普瑞酮可提高魚(yú)體熱激反應(yīng)后消化道抗氧化相關(guān)能力,同時(shí)相對(duì)的降低丙二醛和羥自由基的水平,進(jìn)而降低機(jī)體的應(yīng)激損傷。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4
【圖文】：

圖 2.1 前腸黏膜絨毛長(zhǎng)度 圖 2.2 中腸黏膜絨毛長(zhǎng)度Fig.2.1 Before the intestinal mucousmembrane villus length.Fig.2.2 Middle the intestinal mucous membranevillus length.圖 2.3 后腸絨毛長(zhǎng)度

圖 2.1 前腸黏膜絨毛長(zhǎng)度 圖 2.2 中腸黏膜絨毛長(zhǎng)度Fig.2.1 Before the intestinal mucousmembrane villus length.Fig.2.2 Middle the intestinal mucous membranevillus length.圖 2.3 后腸絨毛長(zhǎng)度

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2715018