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替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道HSPs誘導(dǎo)效應(yīng)及其應(yīng)激保護作用初步研究

發(fā)布時間：2020-06-15 21:23

【摘要】：斜帶石斑魚是我國重要的高檔海水養(yǎng)殖魚類,高溫脅迫是影響其生長和成活的關(guān)鍵環(huán)境因素。消化道是斜帶石斑魚高溫應(yīng)激的主要靶器官之一,而熱休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)在細胞應(yīng)激損傷修復(fù)和抑制細胞凋亡方面發(fā)揮重要功能,能有效保護機體抵御應(yīng)激損傷。替普瑞酮作為HSPs誘導(dǎo)劑,其在人類、大鼠和畜禽胃腸黏膜損傷的保護已有相關(guān)研究和應(yīng)用,而至今在水產(chǎn)動物中未見相關(guān)報道。本文通過拌料投喂不同劑量替普瑞酮分析其對斜帶石斑魚消化道組織的影響,為今后斜帶石斑魚的養(yǎng)殖業(yè)提供理論依據(jù)。研究的內(nèi)容主要包括以下四個部分:(1)替普瑞酮對斜帶石斑魚肝臟功能指標的影響通過拌料投喂,觀察斜帶石斑魚肝臟功能指標的數(shù)據(jù),研究不同劑量的替普瑞酮(100mg/Kg、200 mg/Kg、400 mg/Kg)對斜帶石斑魚肝臟功能指標的影響。結(jié)果顯示:與對照組(0 mg/Kg)相比,低劑量組(100 mg/Kg)和中劑量組(200 mg/Kg)的谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和總膽紅素水平差異不顯著(p0.05),高劑量組(400 mg/Kg)斜帶石斑魚谷草轉(zhuǎn)氨酶和總膽汁酸的水平升高顯著,達到411.6±50.1(μmol/L)和24.8±5.1(μmol/L)。結(jié)果表明,低劑量(100 mg/Kg)和中劑量(200 mg/Kg)的替普瑞酮飼料添加量對斜帶石斑魚肝臟功能指標沒有影響,而高劑量(400 mg/Kg)的替普瑞酮對斜帶石斑魚肝臟功能有損傷,證明有一定的毒性。(2)替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道熱激誘導(dǎo)損傷保護的組織學(xué)分析通過消化道組織切片,觀察了斜帶石斑魚投喂替普瑞酮以及熱激損傷后的腸道組織學(xué)變化。結(jié)果顯示,處理組石斑魚腸道黏膜絨毛的長度、寬度和腸道肌肉層的厚度明顯的高于對照組。替普瑞酮投喂15 d后,各處理組石斑魚腸道黏膜絨毛長度、寬度和腸道肌肉層的厚度完全不同;低劑量組(100 mg/Kg)對腸道黏膜絨毛長度和寬度的生長穩(wěn)定性好,中劑量組(200 mg/Kg)對腸道肌肉層的厚度的穩(wěn)定性好。提升水溫8℃進行高溫應(yīng)激2 h,應(yīng)激后0 h與48 h對比,處理組的腸道黏膜絨毛的長度、寬度和腸道肌肉層厚度前后較穩(wěn)定。組織學(xué)觀察顯示,替普瑞酮不僅能夠促進腸道黏膜絨毛的長度、寬度和腸道肌肉層厚度的生長,還能夠維持腸道組織學(xué)生長的穩(wěn)定性。結(jié)果表明,中劑量組(200 mg/Kg)替普瑞酮對于腸道絨毛和肌肉層穩(wěn)定性效果最好。(3)替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道的HSPs熱激誘導(dǎo)效應(yīng)通過酶聯(lián)免疫吸附測定結(jié)果觀察,發(fā)現(xiàn)添加不同劑量的替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道的HSPs的熱激誘導(dǎo)效應(yīng)明顯。結(jié)果顯示,高溫應(yīng)激后0 h和48 h,處理組誘導(dǎo)的HSP70、HSP60和HSP90的表達明顯的高于對照組。HSP70表達的水平在160ng/L左右,HSP60在25ng/L左右,HSP90在14ng/L左右,可見HSP70的熱激水平遠遠的高于HSP60的熱激水平和HSP90的熱激水平;胃中的HSPs表達水平高于腸道。結(jié)果表明,替普瑞酮能夠提高魚體消化道HSP 70的表達,而較高的初始表達水平可提高隨后熱應(yīng)激的抵御能力,表現(xiàn)為對熱激的敏感性降低;且熱激恢復(fù)后各處理組HSPs仍維持高表達水平。(4)替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道相關(guān)免疫指標的影響通過免疫酶活力的觀察,發(fā)現(xiàn)添加替普瑞酮對斜帶石斑魚消化道免疫酶活力有顯著的影響。金屬硫蛋白呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,6 h最低,低劑量組(100 mg/Kg)下降較緩慢。細胞色素C水平呈現(xiàn)先高后低的趨勢,而且峰值以6 h為主,與金屬硫蛋白的變化水平相反,這可能是抑制金屬硫蛋白降低的原因之一。HSP70、HSP60和HSP90的最高值主要在6 h達到最高,細胞色素C的峰值也是以6 h為主,因細胞色素C在呼吸電子傳遞鏈中有不可或缺的作用,然而細胞色素C相對于其它蛋白來說更易變異,導(dǎo)致生物體的電子傳遞出現(xiàn)問題而凋亡,HSPs在一定程度上緩解了這種凋亡的產(chǎn)生。低劑量替普瑞酮可提高魚體熱激反應(yīng)后消化道抗氧化相關(guān)能力,同時相對的降低丙二醛和羥自由基的水平,進而降低機體的應(yīng)激損傷。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【圖文】：

絨毛,黏膜,前腸,長度

圖 2.1 前腸黏膜絨毛長度圖 2.2 中腸黏膜絨毛長度Fig.2.1 Before the intestinal mucousmembrane villus length.Fig.2.2 Middle the intestinal mucous membranevillus length.圖 2.3 后腸絨毛長度

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