【摘要】：作為我國淡水養(yǎng)殖的四大家魚之一的草魚,由于味道鮮被廣大消費者所喜愛。草魚是常見優(yōu)質蛋白的良好來源之一,具有很高的營養(yǎng)價值,如今草魚越來越被廣泛地作為原料,來加工提取各種產品和功能性食品,草魚抗氧化肽便是其中的一種�？寡趸囊郧宄杂苫鶃眢w現(xiàn)它在體內的抗氧化性,我們通過酶解食源性蛋白來制備出的這種生物活性物質。抗氧化肽的氨基酸組成和結構都影響著其活性大小,因此,利用現(xiàn)代生物技術分析抗氧化肽的結構特點,并以單次口服給藥的方式對機體對干預,了解其在體內的抗氧化性和代謝規(guī)律,為完善抗氧化肽在體內體外的抗氧化機理奠定了理論基礎。本文優(yōu)化了酶法制備草魚抗氧化肽的工藝條件；分離純化出一種草魚抗氧化肽單體,并成功鑒定出其一級結構；研究了經單次口服給藥后,小鼠體內抗氧化肽的吸收、分布情況；對經單次口服干預后,小鼠血液中酶和MDA的變化情況進行了分析。主要研究結論如下：1.雙酶復合酶解法制備草魚抗氧化肽的最佳工藝為：加木瓜蛋白酶800U／g,中性蛋白酶500U/g,pH為6.5,酶解溫度為50℃,酶解時間4h。得到草魚酶解液對DPPH自由基的清除率達到93.50%,水解度為35.63%,肽得率為97.29%。相對于單酶水解不僅提高了水解度和肽得率,同時提高了對DPPH自由基的清除率。2.利用超濾分離草魚蛋白酶解液得到小于3kDa的組分清除DPPH自由基的能力最好,抑制率為89.27%。組分經過HPLC的分離純化和N端測序后,得了出抗氧化活性較好的四肽：WEPH,當其濃度為1mg/mL時,對DPPH自由基的清除率達到73.52%,同時根據抗氧化肽的一級結構分析了氨基酸對肽抗氧化能力的影響。3.鼠單次灌胃2mg/kg·BW, 0.1mL的FITC-WEPH后,血藥濃度表明。給藥后2h血藥濃度達到最大,并得出其絕對生物利用率為10.49%。實驗表明,給藥2h之內,胃腸中的FITC-WEPH分布較多,給藥6h后,所有臟器內FITC-WEPH的含量都呈現(xiàn)下降趨勢。肝臟中FITC-WEPH的蓄積量較高,代謝較慢,這表明FITC-WEPH參與了肝臟的氧化代謝。在腦中也有分布少量的FITC-WEPH,表明了其可以通過血腦屏障,參與大腦正常代謝活動。4.小鼠經單次灌胃2mg/kg,0.1mL的FITC-WEPH對小鼠血液的酶及MDA均有所影響。給藥后GSH-PX活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,在給藥后4h時達到最大391.78±29.85U/0.1mL；給藥后MDA含量呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢,給藥2h后,含量達到最低,為9.90±1.45mol/mL;給藥后T-SOD活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,給藥后2h達到最高,為142.61±8.09U／mL；給藥后GSH-PX活力呈先上升后下降再上升趨勢,給藥后6h達到最大值T-AOC為10.566±2.05U/mL 。
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS254.1

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