【摘要】：哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水魚(yú)類和無(wú)脊椎動(dòng)物的最常見(jiàn)的病原菌之一,常引起魚(yú)類疾病的發(fā)生,對(duì)海水養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。最新研究表明,Ⅵ型分泌系統(tǒng)(T6SS)在哈維氏弧菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)、生物膜形成、鞭毛合成和細(xì)胞毒力等致病相關(guān)功能中可能發(fā)揮了重要作用。TssJ是T6SS核心亞基之一,通過(guò)N末端�；陌腚装彼釟埢^定在外膜上的外膜脂蛋白。本論文利用哈維氏弧菌tssJ基因構(gòu)建了候選哈維氏弧菌的亞單位疫苗,DNA疫苗和以益生菌傳遞重組DNA疫苗,分析這三種疫苗對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斜帶石斑魚(yú)(Epinephelus coioides)的免疫保護(hù)作用。本研究以哈維氏弧菌GDH11385基因組DNA為模板,擴(kuò)增獲得了tssJ基因,構(gòu)建候選亞單位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌傳遞的重組DNA疫苗pCTssJ/F3。結(jié)果表明,以斜帶石斑魚(yú)為動(dòng)物模型,免疫4周后,致病菌哈維氏弧菌進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn),亞單位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌傳遞的重組DNA疫苗pCTssJ/F3,其相對(duì)免疫保護(hù)率分別為45%,60%,49.86%。血清免疫指標(biāo),酸性磷酸酶(ACP)活力結(jié)果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ組和免疫pCTssJ組均與其PBS對(duì)照組有顯著提高(p0.05),而免疫pCTssJ/F3組則在免疫3周后與PBS對(duì)照組有顯著提高(p0.05);堿性磷酸酶(AKP)活力結(jié)果表明,在免疫1周后,免疫pCTssJ組與PBS對(duì)照組有顯著提高(p0.05),而免疫rTssJ組和免疫pCTssJ/F3在免疫2周與對(duì)照組PBS有顯著提高,其中rTssJ組在免疫2和3周后均與免疫1周后有顯著提高,且其活力在3周達(dá)最大值;超氧化物歧化酶(SOD)活力結(jié)果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ組和pCTssJ組與對(duì)照組PBS有顯著提高(p0.05),而免疫pCTssJ/F3組則在免疫3周后與PBS對(duì)照組有顯著提高(p0.05)。綜上所述,tssJ基因無(wú)論是作為亞單位疫苗、DNA疫苗還是益生菌傳遞DNA疫苗,都具有一定的免疫保護(hù)效率,本研究為下一步深入研制具有高保護(hù)率的哈維氏弧菌候選疫苗奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

方、不好動(dòng)便于鮮活運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，是我國(guó)沿海地區(qū)的重要海水養(yǎng)殖種類之一。聯(lián)合逡逑國(guó)糧含及農(nóng)業(yè)組織（Ｔｈｅ邋Ｆｏｏｄ邋ａｎｄ邋Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ邋Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋化ｅ邋Ｕｎｉｔｅｄ邋Ｎａｔｉｏｎｓ，逡逑ＦＡＯ）的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示（圖１．），在２０１０－２０１４年，亞洲在海水環(huán)境中的水產(chǎn)品中石逡逑斑魚(yú)的總量從５方４０．５噸增長(zhǎng)至１００３％．４２巧，其中中國(guó)石斑魚(yú)的產(chǎn)量從４９％０噸逡逑增長(zhǎng)到８８１３０噸。逡逑Ｇｌｏｂａｌ邋Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ邋Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｆｏｒ邋ｓｐｅｃｉｅｓ邋（ｔｏｎｎｅｓ）逡逑Ｓｏｕｒｃｅ：邋ＦＡＯ邋ＦｉｓｈＳｔａｔ逡逑７５０逡逑５００邐Ｉ逡逑２５０邐｜Ｈ逡逑０邐＿邋ｌｌｌＪｌｌｉｌ逡逑＾１９５０邐１９６０邐１９７０邐１９Ｓ０邐１９９０邐２０００邐２０１０逡逑■邋Ｅｐｉｎｅｐｈｅｉｕｓｃｏｉｏｉｄｅｓ逡逑圖１．邐１９５０－２０１４年的全球斜帶石斑魚(yú)總產(chǎn)量（參考ＦＡＯ）逡逑Ｆｉｇ．邋１．邋Ｔｈｅ邋ｗｏｒＩｃＨｏｔａｌ邋ｙｉｅｌｄ邋ｏｆ邋￡７＂邱Ａｅ／ｗ邐ｄｕｒｉｎｇ邋１９５０－２０１４邋ｙｅａｒｓ．（ＦＡＯ）逡逑隨著石斑魚(yú)的生殖生長(zhǎng)調(diào)控及人工育種技術(shù)的成熟，使得苗種繁育和成魚(yú)的養(yǎng)逡逑殖進(jìn)入大規(guī)模的發(fā)展，養(yǎng)殖密度不斷的增加，從而引起水體的氨氮和亞硝酸的含量逡逑增加，，導(dǎo)致其水體環(huán)境不斷惡化，使得各類有害生物在水體里大量的繁殖。因此，逡逑各種石斑魚(yú)疾病也隨之而來(lái)，如細(xì)菌性疾�。ɑ【�，粘細(xì)菌病等），病毒性疾�。苠义霞耗夷[病等），寄生蟲(chóng)疾病（小瓜蟲(chóng)病等）�；【ǎ兹纾埃┦撬a(chǎn)養(yǎng)殖中最常見(jiàn)、流行逡逑廣、危害嚴(yán)重的致病性病原菌之一

ｐＥＴ－３２ａ表達(dá)系統(tǒng)本身誘導(dǎo)蛋白約為２１ｋＤａ而ＴｓｓＪ蛋白分子量大約為１６逡逑ｋＤａ，因此本實(shí)驗(yàn)ＴｓｓＪ融合蛋白大小約為３７邋ｋＤａｎＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳結(jié)果顯示ＴｓｓＪ蛋逡逑白提取約３７邋ｋＤａ處出現(xiàn)目的條帶（圖３．），而ｐＥＴ－３２ａ的電泳結(jié)果顯示為２１邋ｋＤａ逡逑處出現(xiàn)目的條帶（圖４．）．逡逑Ｍ１２３４５６邐４邋３邋２邋１邋Ｍ邋ｋＤａ逡逑ＫＪＬ／ｃＩ邋．邐邐邐邐＇一，．．＇＇一邋邋邋邋邋邋邋．．．．．．＾邐一中：．．■逡逑４５．０寧巡y泵箠Γ海壕灣義蟉"ｇ邋＇邋ＷＨｆＭＨＭ邐私＊＇＾邋冷邐Ｗ＊邋

本文編號(hào)：2699527