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青蝦卵黃蛋白原和卵黃蛋白原受體基因的克隆及功能研究

發(fā)布時間:2020-06-05 19:00
【摘要】:青蝦學名日本沼蝦(Macrobrachium nipponensis)俗稱河蝦,廣泛分布在我國淡水水域。屬于節(jié)肢動物門(Arthropoda),甲殼綱(Crustacea),十足目(Decapoda),長臂蝦科(Palaemonidae)、沼蝦屬(Macrobrachium)。近年來,隨著青蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的規(guī);瘮U大、年產(chǎn)量的提高,在生產(chǎn)中出現(xiàn)了一系列亟待解決的難題,其中青蝦個體小型化"性早熟"問題最為突出。在養(yǎng)殖池塘中小蝦性腺過早成熟產(chǎn)卵,導致青蝦個體變小、池塘養(yǎng)殖密度過大、多代同堂等一系列問題,制約著青蝦產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。性腺的成熟與生殖調(diào)控基因密切相關(guān),參與生殖調(diào)控的基因很多,其中卵黃蛋白原(Vitellogenin,Vg)和卵黃蛋白原受體(Vitellogeninreceptor,VgR)在卵子發(fā)生過程中起著十分關(guān)鍵的作用。目前,在青蝦中曾經(jīng)克隆了 Vg基因的短片段,但對于其功能研究還未見報道,關(guān)于VgR基因的研究還十分薄弱。本研究以青蝦為研究對象,擬開展卵黃蛋白原基因和卵黃蛋白原受體基因的研究,根據(jù)實驗室已構(gòu)建的精卵巢文庫獲取的基因短片段,采用cDNA末端快速擴增(Rapid AnplificationofcDNA Ends,RACE)技術(shù)克隆獲得了 Vg基因和VgR基因的全長cDNA序列,并研究了在不同組織、成體不同發(fā)育時期、卵巢不同發(fā)育時期的表達規(guī)律;與此同時,通過眼柄摘除和RNAi,研究了 Mn-VgR和Mn-Vg基因的功能以及在卵子發(fā)生過程中之間的相互調(diào)控關(guān)系。采用RACE技術(shù)獲得青蝦Vg基因的全長cDNA序列全長約7804bp,ORF共編碼2536個氨基酸殘基,蛋白分子量為286.810kDa,熒光定量結(jié)果表明,Mn-Vg基因在雌蝦的肝胰腺、血淋巴和卵巢中高表達,其中肝臟表達量最高。在雄蝦的各個組織基本不表達。Mn-Vg在胚胎發(fā)育的原腸期和n炞從滋迤詒澩锪拷細。哉C瞿さ諞惶轂澩锪看锏椒逯,

本文編號:2698473

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