發(fā)布時間：2020-06-03 23:34

【摘要】：大麻素是一類能夠通過作用于大麻素受體,調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放,從而調(diào)節(jié)神經(jīng)、免疫等功能的化合物。人體內(nèi)合成和分泌的一些小分子化合物也能作用于大麻素受體,被稱為內(nèi)源性大麻素。在無脊椎動物中內(nèi)源性大麻素已有發(fā)現(xiàn)。目前,已在紫貽貝中(Mytilus edulis)、淡水水螅(Hydra vulgaris)等中提取到N-花生四烯酰乙醇胺(ananadamide,AEA)、2-花生四烯酰甘油酯(2-arachidonoylgly erol,2-AG)等內(nèi)源性大麻素(Sepe et al.,1998)。并且,在斑馬貽貝(Dreissena polymorpha)中的研究表明,AEA及其類似物能夠抑制斑馬貽貝的附著,并且這個作用是可逆的,說明內(nèi)源性大麻素很可能參與斑馬貽貝附著的調(diào)控(Angarano et al.,2009)。翡翠貽貝(Perna viridis)作為我國沿海一種主要的污損貝類,關(guān)于其附著的相關(guān)機制,研究相對較少。本文,根據(jù)以上研究結(jié)果,初步探討了內(nèi)源性大麻素在翡翠貽貝附著中的作用。得到的主要結(jié)果如下:(1)AEA、2-AG、AA對翡翠貽貝的附著均有一定的抑制作用。它們可能參與了翡翠貽貝附著的調(diào)控。大麻素受體激動劑AM1241、HU308以及MAGL降解酶JZL184對翡翠貽貝的附著也有一定的抑制作用。說明AEA、2-AG可能是通過翡翠貽貝大麻素受體對其附著進行調(diào)控的。CB1受體拮抗劑SR141716A與AM251對AEA在翡翠貽貝附著中的作用并沒有明顯的競爭性抑制作用,CB2受體拮抗劑SR144528對2-AG在翡翠貽貝附著中的作用也沒有明顯的抑制作用。說明翡翠貽貝中雖然很可能存在大麻素受體,但是與脊椎動物中的大麻素受體不完全相同。AEA和2-AG對翡翠貽貝附著蛋白表達的影響實驗結(jié)果表明,AEA可能是通過影響了 FP1V-1的表達,從而抑制了翡翠貽貝的附著。2-AG可能是通過影響了 FP1V-1、FP1V-2、FP2、FP4V-1和FP4V-2的表達從而抑制了翡翠貽貝的附著。(2)LC-MS/MS結(jié)果表明,翡翠貽貝中確實存在AEA、2-AG、OEA、PEA四種內(nèi)源性大麻素。附著和不附著翡翠貽貝內(nèi)源性大麻素含量對比,結(jié)果表明不附著翡翠貽貝中2-AG的含量較高,說明2-AG可能參與了翡翠貽貝不附著的調(diào)控。(3)轉(zhuǎn)錄組Unigene的注釋中,在Nr數(shù)據(jù)庫中注釋到一個CB1類受體。證明翡翠貽貝中確實存在大麻素受體。附著和不附著翡翠貽貝轉(zhuǎn)錄組結(jié)果表明,在不附著組中2-AG的含量比CON組確實要高。對轉(zhuǎn)錄組進行差異表達分析,結(jié)果表明。一方面2-AG可能作用于突觸前膜上的TRP離子通道,使細胞內(nèi)Ca2+濃度降低,引起DSE現(xiàn)象,導(dǎo)致NO合成受阻,從而抑制翡翠貽貝的附著。另一方面2-AG可能作用于線粒體膜上的CB受體,影響細胞內(nèi)能量的代謝,從而抑制翡翠貽貝的附著。
【圖文】：

圖１．２貽貝的剖面圖和足絲的結(jié)構(gòu)（Ｈｅａｔｈｅｒ邋ｅｔａｌ．，，邋２００７）逡逑Ｆｉｇ邋．１．２邋Ａｎａｔｏｍｙ邋ｏｆ邋ｍｕｓｓｅｌ邋ａｎｄ邋ｂｙｓｓｕｓ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ逡逑于以上研究結(jié)果，本研究以翡翠貽貝為實驗材料，探究內(nèi)源性

２．２．１內(nèi)源性大麻素對翡班始貝附著的影響逡逑２．２．２．１邋ＡＥＡ對翡翠始貝附著的影響逡逑不同濃度ＡＥＡ對翡翠貽貝附著的影響如圖２．１所示。在ＡＥＡ處理的２４邋ｈ逡逑中，從平均足絲數(shù)來看，在濃度為１０邋ＨＭ的ＡＥＡ中就開始與ＤＭＳＯ組具有顯著逡逑的差異。而從不附著率來看的話，從濃度為２０邋ｍＭ開始，ＡＥＡ才開始對翡翠貽逡逑貝附著具有極顯著的抑制作用。并且，在后遺效應(yīng)實驗中，實驗組不論是不附著逡逑率還是平均足絲數(shù)都與對照組沒有顯著的差異，說明ＡＥＡ對翡翠貽貝附著的抑逡逑制是可逆的。根據(jù)足絲計算其ＥＣ５Ｑ＝１６．２６ｍＭ；根據(jù)不附著率計算其ＥＣ５Ｑ＝４７．３４逡逑ＭＭ。另外，由圖還可以看出ＡＥＡ濃度梯度實驗最初的化合物處理階段和后遺作逡逑用檢驗實驗（（ｉｎｉｔｉａｌ邋２４ｈ邋ｅｘｐｏｓｕｒｅ；邋２４ｈ邋ｐｏｓｔ－ｅｘｐｏｓｕｒｅ）過程中濃度邋１邋ｊｊＭ、５邋｜ｊＭ、逡逑２１逡逑
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

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本文編號：2695567