【摘要】：目的：本研究旨在針對真鯛虹彩病毒(Red sea bream iridovirus、錦鯉皰疹病毒(Koi herpes virus, KHV)、流行性造血器官壞死病毒(Epizootie hematopoietie necrosis virus, EHNV)、鯉春病毒血癥病毒(Spring viremia of carp virus, SVCV)、傳染性造血器官壞死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus、病毒性出血性敗血癥病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)這六種病毒的宿主不同建立多重LAMP (Loop mediated isothermal amplification)檢測方法,該方法是對同一宿主體內的不同病原同步進行檢測,這大大節(jié)省了檢測時間和成本。方法：針對這六種病毒建立了單重LAMP檢測方法,對其反應條件進行了優(yōu)化,并檢測了敏感性和特異性。在上述實驗的基礎上根據宿主不同分別組裝多重LAMP反應體系,并檢測了其特異性和敏感性。酶切鑒定更進一步驗證該方法的特異性。結果：這六種病毒的單重LAMP檢測方法的最低檢測限分別為：100拷貝/μL,10拷貝/μL,ITCID50,10拷貝/μL,ITCID50, ITCID500且與其它幾種重要的水生動物疫病病原無交叉反應,說明建立的LAMP檢測方法特異性好。研究二建立的KHV和SVCV的多重LAMP最低檢測限達到100拷貝/μL。與其它幾種重要的水生動物疫病病原無交叉反應,顯示該方法特異性好。與單重LAMP相比,敏感性有所降低。研究三建立的EHNV. IHNV和VHSV的多重LAMP最低檢測限是ITCID500與幾種重要水生動物疫病病原不發(fā)生交叉反應,有良好特異性。對LAMP擴增產物分別采用特定限制性內切酶進行消化,結果表明,與預期酶切片段相符合,可以實現特異性檢測的目的。結論：以單重LAMP檢測方法為基礎,優(yōu)化反應體系,組建了多重LAMP檢測方法,實現了從同一宿主中同時檢測多種病毒的目的。
【圖文】：

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本文編號：2684396