【摘要】：遲緩愛德華菌(Edwardsiella tarda)廣泛分布在自然界,尤以水中多見,對人和動物具有一定的致病性。遲緩愛德華菌是危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要病原菌,該菌能感染魚類、貝類、兩棲類、爬行類等多種水生動物,不同國家和地區(qū)都報道過由遲緩愛德華菌感染引發(fā)的病害,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前預(yù)防和治療愛德華菌病的主要方法仍是消毒劑、抗生素等,但由其引起的細(xì)菌耐藥性、食品藥物殘留等問題越來越嚴(yán)重。本試驗從革胡子鯰魚中分離到一株細(xì)菌(TANX),并對其進(jìn)行鑒定與生物學(xué)特性分析。結(jié)果顯示,TANX菌株為遲緩愛德華菌,對健康羅非魚(Tilapia Mossambica)人工感染試驗表明,該分離菌株的致病力非常弱,為天然弱毒株。用PCR方法檢測該菌株中遲緩愛德華菌6種常見毒力基因檸檬酸裂解酶(cit C)、鞭毛蛋白(fim A)、谷氨酸脫羧酶同工酶(gad B)、過氧化氫酶(Kat B)、殺傷因子(muk F)、TTSS基因(esr B)基因,發(fā)現(xiàn)TANX菌中只含有cit C和muk F兩種毒力基因,而強(qiáng)毒株含有cit C、fim A、gad B、Kat B、muk F、esr B。fim A基因起黏附、入侵宿主細(xì)胞的功能;gad B、kat B、esr B基因使遲鈍愛德華氏菌能在宿主細(xì)胞內(nèi)存活并超越宿主的防御屏障(依賴血清和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷作用),TANX菌株不含這些毒力基因,致病力較弱。藥敏試驗結(jié)果顯示TANX菌株對頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、氧氟沙星、左氟沙星等藥物敏感,對青霉素G、氨芐西林、四環(huán)素、多粘菌素B等藥物耐受。為了研究遲緩愛德華菌弱毒疫苗對羅非魚(Oreochromis niloticus)免疫保護(hù)效果,本試驗制備了遲緩愛德華菌弱毒疫苗(LAV)和福爾馬林強(qiáng)毒株滅活疫苗(FKC),利用腹腔注射、口服兩種途徑免疫羅非魚,定期采集各組羅非魚的頭腎和脾臟以及血清,檢測各組抗體水平,血清中SOD(超氧化物歧化酶)、AKP(堿性磷酸酶)、ACP(酸性磷酸酶)的活性,檢測頭腎、脾臟中干擾素IFN、白介素IL-1、腫瘤壞死因子TNF、Caspase3的相對表達(dá)量;最后對各組羅非魚進(jìn)行攻毒試驗,計算各組的相對免疫保護(hù)率。結(jié)果表明,實驗組抗體水平顯著高于對照組(P0.01),弱毒疫苗(LAV)組抗體水平高于滅活疫苗(FKC)組,差異不顯著,免疫后3周和4周,LAV注射組的抗體水平顯著高于FKC組(P0.05);酶活力檢測結(jié)果顯示,LAV組的ACP、AKP活力差異不顯著,FKC注射組的SOD活力顯著高于對照組和FKC口服組(P0.05);熒光定量檢測結(jié)果表明,免疫28天,IFN在頭腎中的表達(dá)量LAV組明顯高于FKC組(P0.01),而FKC組IL-1在頭腎中的表達(dá)量明顯高于LAV組(P0.01),LAV組頭腎中IFN、TNF、Caspase3的表達(dá)量和脾臟中Caspase3的表達(dá)量高于FKC組,均顯著高于對照組(P0.05);免疫保護(hù)率結(jié)果表明,LAV注射、口服組的相對保護(hù)率分別為90.5%、63.6%,FKC注射、口服組的相對保護(hù)率分別為76.1%、59%,免疫保護(hù)率均顯著高于對照組(P0.05)。綜上所述,弱毒疫苗能更好的刺激機(jī)體的免疫應(yīng)答,可作為防遲緩愛德華菌病的有效疫苗。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S943

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