發(fā)布時間：2020-05-19 13:50

【摘要】：為研究黃顙魚感染擬態(tài)弧菌(Vibrio mimicus)的病理損傷特征及病原菌在魚體內(nèi)的分布規(guī)律,以1.0×106 CFU·mL-1濃度菌液浸浴感染黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)30 min,感染后Oh、4h、8h、16h、24h、36h、48h、60 h、72 h剖殺取樣,石蠟切片,HE染色觀察病理損傷,qPCR檢測病原菌在體內(nèi)的動態(tài)分布。結(jié)果顯示,被感染魚的主要臨床癥狀為精神沉郁,厭食,體表出血性潰瘍,肛門紅腫；剖檢見鰓與肝點狀出血,部分魚見脾、腎腫大,肝臟蒼白色,淡紅色腹水,腹膜出血,鰓絲蒼白。病理組織學(xué)上,皮膚肌肉、鰓、腸道出現(xiàn)病變時間最早,其中皮膚肌肉病變最為嚴(yán)重。16h表皮壞死脫落,真皮輕度出血,鰓絲出血,腸絨毛水腫；24-48h真皮嚴(yán)重出血,肌間隙增寬,炎癥細(xì)胞浸潤,肌纖維變性、壞死；鰓絲毛細(xì)血管擴(kuò)張淤血、出血,上皮細(xì)胞腫脹,局部壞死,脫落,腸黏膜上皮與固有膜灶性分離；48-72h表皮與真皮層壞死,脫落,其下肌纖維溶解壞死,其內(nèi)見多量病原菌：鰓小片毛細(xì)血管出血,上皮細(xì)胞灶性水腫浮離或壞死脫落；感染后36 h腎臟出現(xiàn)淤血,與腎小球腫大,肝、脾、腎與心48 h后出現(xiàn)不同程度的淤血、出血,變性,局灶性的壞死和炎癥細(xì)胞浸潤。病原菌的qPCR檢測顯示細(xì)菌首先出現(xiàn)于鰓、腸與皮膚,感染后4h即在鰓、腸道、皮膚肌肉中檢測到細(xì)菌,檢出量分別為1.3×102 CFU·mg-1,2.6×102 CFU·mg-1,4.7×102 CFU·mg-1。腸道中帶菌量隨后逐漸降低,而鰓與皮膚肌肉中細(xì)菌含量隨感染時間延長而增加,72 h鰓中細(xì)菌含量達(dá)到4.7×103 CFU·mg-1,皮膚肌肉中細(xì)菌含量達(dá)到4.5×107 CFU·mg-1,其含量顯著高于其他器官。感染后24 h腎臟中檢測出病原菌,感染后36 h肝、脾、心中檢測出病原菌,隨感染時間延長含量逐漸升高,菌量介于1.9×101～4.7×102 CFU·mg-1之間,腦中未檢出病原菌。qPCR檢測結(jié)果與組織損傷進(jìn)程基本一致,表明擬態(tài)弧菌首先粘附于黃顙魚腸道,皮膚肌肉和鰓,同時可侵染多數(shù)內(nèi)臟器官,但主要于皮膚肌肉內(nèi)進(jìn)行繁殖。免疫組織化學(xué)法對皮膚肌肉中的細(xì)菌進(jìn)一步定位發(fā)現(xiàn),病原菌主要分布于皮下疏松結(jié)締組織層與骨骼肌肌纖維上。
【圖文】：

圖２、３－Ａ）

３．３溶血素基因（Ｖｍｈ）的擴(kuò)X楀義狹街昴馓【卸汲曬┰齔瞿康奶醮笮∥歟希希猓鹱笥遙跣暈椿�。（见哇E擔(dān)╁義希停戾危插危沖義希�，………命姲櫫x希保保保痹燦臑擔(dān)桑桑桑傘義賢跡德逖鼗潁鄭恚杼匾旎蔚睦┰鎏醮笮。保盎皰義希停玻埃ǎ模危粒恚幔潁耄澹潁�，】．拟态弧|!ＤＮＡ１號、２粗、態(tài)弧茵ＤＮＡ：＂４、３．陰件－對照．逡逑Ｆｉｇ邋５邋Ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ邋ｇｅｎｅ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｂａｎｄｓ邋１０６邋ｂｐ．逡逑Ｍ．２００邋ＤＮＡ邋ｍａｒｋｅｒ、１．邋Ｎｏ．邋１邋ｖｉｂｒｉｃＭｒＨｍｉｃｕｓ邋ＤＮＡ、：邋Ｎｏ邋２邋ｖｉｂｒｉｏ邋ｍｉｍｉｃｕｓ邋ＤＮＡ、３．邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｍｒｏＬ逡逑３．４邋Ｖｍｈ的Ｔ克隆及ＰＣＲ鑒定逡逑擴(kuò)增出的目的片段經(jīng)膠回收，轉(zhuǎn)化子ＤＨ５ａ感受態(tài)細(xì)胞，后禹ｔ選氨韋抗性菌株１０逡逑株進(jìn)行菌落ＰＣＲ初步鑒定。經(jīng)菌落ＰＣ民鑒定，挑選的１０株氨節(jié)抗性單菌落，其中８逡逑為陽性克隆茜。挑選一株陽性克隆菌，ＬＢ肉湯３７°Ｃ培養(yǎng)過夜后，提取質(zhì)粒。利用逡逑ＶｍＨ和Ｍ１３兩對引物進(jìn)行ＰＣＲ反應(yīng)，結(jié)果顯示ＶｍＨ擴(kuò)增引物條帶大小在ｌＯＯｂｐ左逡逑右，Ｍ１３擴(kuò)增條帶大小在２００ｂＰ左右，說明特異性片段成功連接至ＰＭＤ１８－Ｔ載體上。逡逑（見圖６）逡逑Ｍ邐】邐三逡逑邐逡逑Ｌ．逡逑圖６質(zhì)粒為橫板
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S943

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳成;耿毅;汪開毓;余澤輝;陳德芳;歐陽萍;黃小麗;李亞軍;唐俊輝;;擬態(tài)弧菌感染黃顙魚的動態(tài)病理損傷及病原分布研究[J];南方水產(chǎn)科學(xué);2017年01期

2 周勇;江南;曾佳;范玉頂;劉文枝;司凱歌;曾令兵;;黃顙魚腹水征病原菌的分離與鑒定[J];中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn);2019年01期

3 孫昌飛;祭仲石;韋艷;厲成新;王中清;;黃顙魚爛身病病原菌的分離及藥敏實驗[J];漁業(yè)致富指南;2019年16期

4 楊正時;鐘熙;王曉新;馬東光;謝念銘;劉書恩;劉玉芬;楊云英;蘆致建;;國內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)新的腹瀉病原菌——擬態(tài)弧菌[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1985年10期

5 劉方;史艷偉;時彥民;蔣幫銅;楊淑英;孟蝶;;黃顙魚“紅頭病”病原菌的分離鑒定與藥敏實驗研究[J];科學(xué)養(yǎng)魚;2015年07期

6 張遠(yuǎn)炯;;黃顙魚常見細(xì)菌性疾病及其防治[J];漁業(yè)致富指南;2010年24期

7 胡若雨;姚利娟;黃美齊;朱成科;;黃顙魚腹水病病原菌的分離鑒定及治療[J];科學(xué)養(yǎng)魚;2014年06期

8 陳昌福;宋剛杰;孫立威;吳強(qiáng)強(qiáng);何登平;張加林;;黃顙魚“裂頭病”細(xì)菌性病原的分離與鑒定[J];當(dāng)代水產(chǎn);2014年02期

9 姜丙利;;釣黃顙魚的技法[J];垂釣;2019年10期

10 趙昕;;稻田生態(tài)養(yǎng)殖黃顙魚效益好[J];農(nóng)家致富;2019年18期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳成;耿毅;汪開毓;余澤輝;李亞軍;陳德芳;歐陽萍;黃小麗;;擬態(tài)弧菌感染黃顙魚的動態(tài)病理損傷及病原分布研究[A];2016年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

2 張云龍;姚曉麗;張子涵;董昭然;沈志剛;;黃顙魚、瓦氏黃顙魚及雜交黃顙魚肌肉營養(yǎng)成分的比較研究[A];2017年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2017年

3 張娟;張其中;張占會;崔淼;;黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)HSC70基因及其組織表達(dá)分析[A];中國魚類學(xué)會2008學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

4 張晉;謝彬月;劉英杰;梅潔;;應(yīng)用小分子氯喹提升黃顙魚精子質(zhì)量的研究[A];2016年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

5 王永杰;陳紅蓮;江海龍;甘小順;;全雄黃顙魚常見疾病防控技術(shù)[A];2015年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2015年

6 蔣業(yè)林;王永杰;張波濤;張厚群;;太陽能網(wǎng)箱養(yǎng)殖黃顙魚集成技術(shù)研究[A];中國南方十六�。ㄊ小^(qū)）水產(chǎn)學(xué)會漁業(yè)學(xué)術(shù)論壇第二十六次學(xué)術(shù)交流大會論文集（上冊）[C];2010年

7 王達(dá);翟艷花;周莉;陳宏溪;桂建芳;;黃顙魚性別分子標(biāo)記的篩選和鑒定[A];湖北省遺傳學(xué)會、江西省遺傳學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2006年

8 肖慧;葛欣琦;張世寬;毛慧玲;;江西野生黃顙魚聚類分析的初步研究[A];中國南方十六省（市、區(qū)）水產(chǎn)學(xué)會漁業(yè)學(xué)術(shù)論壇第二十六次學(xué)術(shù)交流大會論文集（下冊）[C];2010年

9 歐仁建;曹海鵬;鄭衛(wèi)東;胡鯤;許佳露;楊先樂;;黃顙魚卵致病性綿霉的分離鑒定與藥敏特性[A];2012第四屆全國現(xiàn)代生態(tài)漁業(yè)與水環(huán)境綜合治理技術(shù)匯總[C];2012年

10 歐仁建;曹海鵬;楊昊霖;楊先樂;許佳露;;黃顙魚卵致病性綿霉的分離鑒定與系統(tǒng)發(fā)育分析[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 朱琳;“游”進(jìn)韓國的黃顙魚[N];營口日報;2015年

2 農(nóng)保;黃顙魚價創(chuàng)新高 苗種訂單火爆[N];中國漁業(yè)報;2014年

3 黃月雄;黃顙魚花身病的防控與治療[N];中國漁業(yè)報;2014年

4 王樂;黃顙魚暴頭病致死率極高[N];中國漁業(yè)報;2013年

5 方桐;養(yǎng)全雄黃顙魚畝產(chǎn)可增五成[N];中國漁業(yè)報;2010年

6 鄭燕云;廣東黃顙魚價格走高[N];中國漁業(yè)報;2009年

7 劉中華;廣東黃顙魚需求上升價格回暖[N];中國漁業(yè)報;2009年

8 韓英林　首席記者 王森;黃顙魚“游”進(jìn)韓國[N];盤錦日報;2009年

9 ;黃顙魚綜合混養(yǎng)技術(shù)[N];湖北科技報;2008年

10 呂剛;黃顙魚規(guī)模養(yǎng)殖困難多 混養(yǎng)效果好[N];中國漁業(yè)報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 發(fā)蒙（Farman Ullah（Dawar））;斑點叉尾洶病毒感染及鯰科魚（斑點叉尾洶和黃顙魚）的免疫特性[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳成;擬態(tài)弧菌感染黃顙魚的組織嗜性與動態(tài)病理損傷研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 陳銘;黃顙魚溫和氣單胞菌的特性研究及溶血素基因的克隆與表達(dá)[D];西南大學(xué);2009年

3 馮美惠;黃顙魚重要免疫基因的克隆及低磷飼料中添加維生素D_3對其表達(dá)影響的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

4 葛海燕;皮質(zhì)醇和殼聚糖對黃顙魚免疫機(jī)能及生長的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 歐仁建;黃顙魚卵致病性綿霉的分離鑒定與感染機(jī)制的研究[D];上海海洋大學(xué);2013年

6 諶海虎;贛江南昌段光澤黃顙魚的年齡、生長和繁殖特性的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 胡守奎;擬態(tài)弧菌毒素共調(diào)菌毛的檢測及其生物學(xué)特性研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 耿龍;淀山湖光澤黃顙魚和蝦類生物學(xué)研究及產(chǎn)量估算[D];上海海洋大學(xué);2014年

9 邱柏圣;免疫組織化學(xué)指標(biāo)判斷非肌層浸潤性膀胱癌分期、病理分級的價值[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

10 楊家威;全雄黃顙魚蛋白質(zhì)營養(yǎng)生理及y~+LAT1基因表達(dá)調(diào)控的部分機(jī)制研究[D];揚州大學(xué);2015年

本文編號：2670984