【摘要】：為研究黃顙魚感染擬態(tài)弧菌(Vibrio mimicus)的病理損傷特征及病原菌在魚體內(nèi)的分布規(guī)律,以1.0×106 CFU·mL-1濃度菌液浸浴感染黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)30 min,感染后Oh、4h、8h、16h、24h、36h、48h、60 h、72 h剖殺取樣,石蠟切片,HE染色觀察病理損傷,qPCR檢測病原菌在體內(nèi)的動態(tài)分布。結(jié)果顯示,被感染魚的主要臨床癥狀為精神沉郁,厭食,體表出血性潰瘍,肛門紅腫；剖檢見鰓與肝點狀出血,部分魚見脾、腎腫大,肝臟蒼白色,淡紅色腹水,腹膜出血,鰓絲蒼白。病理組織學上,皮膚肌肉、鰓、腸道出現(xiàn)病變時間最早,其中皮膚肌肉病變最為嚴重。16h表皮壞死脫落,真皮輕度出血,鰓絲出血,腸絨毛水腫；24-48h真皮嚴重出血,肌間隙增寬,炎癥細胞浸潤,肌纖維變性、壞死；鰓絲毛細血管擴張淤血、出血,上皮細胞腫脹,局部壞死,脫落,腸黏膜上皮與固有膜灶性分離；48-72h表皮與真皮層壞死,脫落,其下肌纖維溶解壞死,其內(nèi)見多量病原菌：鰓小片毛細血管出血,上皮細胞灶性水腫浮離或壞死脫落；感染后36 h腎臟出現(xiàn)淤血,與腎小球腫大,肝、脾、腎與心48 h后出現(xiàn)不同程度的淤血、出血,變性,局灶性的壞死和炎癥細胞浸潤。病原菌的qPCR檢測顯示細菌首先出現(xiàn)于鰓、腸與皮膚,感染后4h即在鰓、腸道、皮膚肌肉中檢測到細菌,檢出量分別為1.3×102 CFU·mg-1,2.6×102 CFU·mg-1,4.7×102 CFU·mg-1。腸道中帶菌量隨后逐漸降低,而鰓與皮膚肌肉中細菌含量隨感染時間延長而增加,72 h鰓中細菌含量達到4.7×103 CFU·mg-1,皮膚肌肉中細菌含量達到4.5×107 CFU·mg-1,其含量顯著高于其他器官。感染后24 h腎臟中檢測出病原菌,感染后36 h肝、脾、心中檢測出病原菌,隨感染時間延長含量逐漸升高,菌量介于1.9×101～4.7×102 CFU·mg-1之間,腦中未檢出病原菌。qPCR檢測結(jié)果與組織損傷進程基本一致,表明擬態(tài)弧菌首先粘附于黃顙魚腸道,皮膚肌肉和鰓,同時可侵染多數(shù)內(nèi)臟器官,但主要于皮膚肌肉內(nèi)進行繁殖。免疫組織化學法對皮膚肌肉中的細菌進一步定位發(fā)現(xiàn),病原菌主要分布于皮下疏松結(jié)締組織層與骨骼肌肌纖維上。
【圖文】：

圖２、３－Ａ）

３．３溶血素基因（Ｖｍｈ）的擴X楀義狹街昴馓【卸汲曬┰齔瞿康奶醮�，大小为e希希猓鹱笥遙跣暈椿�。（见哇E擔╁義希停戾危插危沖義�，，………命姲櫫x希保保保痹燦臑擔桑桑桑傘義賢跡德逖鼗潁鄭恚杼匾旎蔚睦┰鎏醮笮。保盎皰義希停玻埃ǎ模危粒恚幔潁耄澹潁浚馓!ＤＮＡ１號、２粗、態(tài)弧茵ＤＮＡ：＂４、３．陰件－對照．逡逑Ｆｉｇ邋５邋Ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ邋ｇｅｎｅ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｂａｎｄｓ邋１０６邋ｂｐ．逡逑Ｍ．２００邋ＤＮＡ邋ｍａｒｋｅｒ、１．邋Ｎｏ．邋１邋ｖｉｂｒｉｃＭｒＨｍｉｃｕｓ邋ＤＮＡ、：邋Ｎｏ邋２邋ｖｉｂｒｉｏ邋ｍｉｍｉｃｕｓ邋ＤＮＡ、３．邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｍｒｏＬ逡逑３．４邋Ｖｍｈ的Ｔ克隆及ＰＣＲ鑒定逡逑擴增出的目的片段經(jīng)膠回收，轉(zhuǎn)化子ＤＨ５ａ感受態(tài)細胞，后禹ｔ選氨韋抗性菌株１０逡逑株進行菌落ＰＣＲ初步鑒定。經(jīng)菌落ＰＣ民鑒定，挑選的１０株氨節(jié)抗性單菌落，其中８逡逑為陽性克隆茜。挑選一株陽性克隆菌，ＬＢ肉湯３７°Ｃ培養(yǎng)過夜后，提取質(zhì)粒。利用逡逑ＶｍＨ和Ｍ１３兩對引物進行ＰＣＲ反應，結(jié)果顯示ＶｍＨ擴增引物條帶大小在ｌＯＯｂｐ左逡逑右，Ｍ１３擴增條帶大小在２００ｂＰ左右，說明特異性片段成功連接至ＰＭＤ１８－Ｔ載體上。逡逑（見圖６）逡逑Ｍ邐】邐三逡逑邐逡逑Ｌ．逡逑圖６質(zhì)粒為橫板
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S943

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本文編號：2670984