【摘要】：白介素22(IL-22)是IL-10家族中的一員,作為一種多功能性細胞因子,在炎癥性疾病中發(fā)揮著重要作用。在機體組織中適量的IL-22有抗菌抑炎、修復(fù)黏膜損傷、促進細胞再生等保護機體的功能,但是過量的IL-22會導(dǎo)致機體發(fā)生功能性紊亂,從而引發(fā)自身免疫疾病。另外,IL-22受體(IL-22RA1)能夠介導(dǎo)IL-22信號的轉(zhuǎn)導(dǎo),IL-22結(jié)合蛋白(IL-22BP)能夠調(diào)控IL-22信號。目前已有大量研究明確了哺乳動物中IL-22、IL-22RA1、IL-22BP的重要性,但是它們在硬骨魚中的關(guān)系和功能地位還有待闡明。本文以草魚為研究模型,首先分離克隆得到IL-22,其全長CDS序列包含510個核苷酸,共編碼169個氨基酸,和其它幾種物種IL-22氨基酸序列比對有14.77%到39.91%的相似度。課題采用原核表達系統(tǒng)、變復(fù)性處理包涵體蛋白、真核表達系統(tǒng)等方法獲取草魚IL-22重組蛋白并驗證了其生物學(xué)活性。另外,在驗證了IL-22定制抗體的特異性后,利用該抗體在蛋白水平證明了PMA刺激草魚頭腎白細胞促進IL-22分泌。隨后,通過染色體基因定位方法分離鑒定了草魚IL-22RA1,其CDS序列包含1533個核苷酸,編碼510個氨基酸,首次獲悉了硬骨魚IL-22RA1編碼序列信息。最后分離克隆了草魚IL-22BP,其CDS序列全長702 bp,共編碼233個氨基酸,和其它幾種物種IL-22BP氨基酸序列比對有31.20%到82.83%的相似度。通過IL-22BP的組織分布分析發(fā)現(xiàn):IL-22BP在小腸、肝臟中分布較多,在頭腎、中腎、脾臟、鰓中分布較少。另外體內(nèi)細菌感染草魚實驗顯示,嗜水氣單胞桿菌感染草魚三天后,草魚各組織中IL-22BP表達水平明顯下降,其中在小腸和肝臟中變化最為明顯,提示IL-22BP可能參與了機體的炎癥調(diào)節(jié)。以上研究獲悉了草魚IL-22、IL-22RA1、IL-22BP的分子和表達信息,為探究它們在硬骨魚免疫調(diào)控中的地位奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

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本文編號：2670881