【摘要】：普通草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)攝食單一餌料蠶豆(Vicia faba)120 d后,可成為風(fēng)味獨(dú)特的脆肉鯇,目前已成為廣東省中山市東升鎮(zhèn)的特色產(chǎn)業(yè),且消費(fèi)范圍也由廣東逐漸覆蓋至全國(guó)。但是,在脆肉鯇養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中常出現(xiàn)的“半脆”、“過(guò)脆”和“腫身病”死亡的現(xiàn)象,曾一度難倒眾多養(yǎng)殖戶(hù),至今對(duì)草魚(yú)脆化時(shí)的生理病理變化過(guò)程仍不清楚。為此,本文首先進(jìn)行肌肉脆化特性分析,再?gòu)哪c道菌群組成與血清免疫酶活性、頭腎與肝臟的超微結(jié)構(gòu)、溶菌酶等免疫基因的定量表達(dá)3個(gè)方面,綜合探討草魚(yú)在不同脆化階段的生理生化狀況,以期闡明脆肉鯇的免疫健康狀態(tài),進(jìn)而為脆肉鯇的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)的指導(dǎo)資料。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.本研究首先檢測(cè)草魚(yú)肌肉脆化效果,為后續(xù)脆肉鯇免疫機(jī)能的研究做準(zhǔn)備。結(jié)果顯示,脆化120 d時(shí),蠶豆組草魚(yú)肌纖維直徑比對(duì)照組減少了28.12%(P0.01),肌纖維密度增加了99.14%(P0.01)。脆化120 d時(shí),蠶豆組草魚(yú)肌肉硬度、彈性、咀嚼性、內(nèi)聚性和膠黏性分別比對(duì)照組增加了39.76%(P0.01)、37.20%(P0.01)、92.82%(P0.01)、30.43%(P0.01)和68.17%(P0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同時(shí)期攝食蠶豆的草魚(yú)肌纖維直徑逐漸減小、肌纖維密度逐漸增大、肌肉硬度與彈性等逐漸增大,表明已獲得不同脆化程度的脆肉鯇。2.檢測(cè)不同脆化階段草魚(yú)腸道菌群組成結(jié)構(gòu)、血清酶活性及生長(zhǎng)性能,進(jìn)而衡量脆肉鯇形成過(guò)程中的生理生化變化。結(jié)果顯示,60~150 d蠶豆組草魚(yú)體重均低于對(duì)照組,90~120 d蠶豆組草魚(yú)頭腎體指數(shù)和肝體指數(shù)均低于對(duì)照組,150 d時(shí)蠶豆組草魚(yú)肝體指數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異;蠶豆組草魚(yú)血清堿性磷酸酶、溶菌酶和補(bǔ)體C3(第30天除外)活性均低于對(duì)照組的,在轉(zhuǎn)投喂飼料后,3種血清酶活性均出現(xiàn)回升趨勢(shì);與對(duì)照組相比,蠶豆組草魚(yú)腸道菌群多樣性降低,芽胞桿菌屬(Bacillus)和鯨桿菌屬(Cetobacterium)等有益菌數(shù)量減少,維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)、溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)和鰻弧菌(Vibrio anguillarum)等條件致病菌數(shù)量增多。兩組草魚(yú)腸道核心菌群主要為變形菌門(mén)(Proteobacteria)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)和梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)。本研究結(jié)果表明,隨著脆化時(shí)間的增加,飼喂蠶豆改變草魚(yú)腸道菌群組成、抑制血清酶活性和生長(zhǎng)性能,在脆化120 d轉(zhuǎn)投飼料后(蠶豆組第150 d時(shí))其腸道菌群、血清酶活性及生長(zhǎng)性能均有所改善。3.為了探究投喂蠶豆對(duì)草魚(yú)免疫相關(guān)組織結(jié)構(gòu)的影響,本研究還觀察了不同脆化階段草魚(yú)頭腎、肝臟和腸道的超微結(jié)構(gòu)變化。超微結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示,蠶豆組草魚(yú)頭腎細(xì)胞出現(xiàn)空泡;脆化后期頭腎細(xì)胞受損,出現(xiàn)組織壞死區(qū)域。蠶豆組草魚(yú)肝臟細(xì)胞逐漸腫大,線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量逐漸減少,并雜亂的分布在細(xì)胞質(zhì)中,竇周隙出現(xiàn)不同程度的損傷,表現(xiàn)為肝細(xì)胞微絨毛和內(nèi)皮細(xì)胞損壞或缺失;脆化后期,肝細(xì)胞核形狀異常,血竇形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂。蠶豆組草魚(yú)腸道粘膜上皮出現(xiàn)炎癥,表現(xiàn)為微絨毛逐漸稀疏、變短,受到損傷;脆化后期粘膜上皮部分區(qū)域微絨毛消失,細(xì)胞間緊密連接暴露,上皮細(xì)胞表面遭到損壞。本研究結(jié)果表明,投喂蠶豆對(duì)草魚(yú)頭腎、肝臟和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響是一個(gè)逐漸變化的過(guò)程,隨著脆化時(shí)間的延長(zhǎng),免疫相關(guān)組織結(jié)構(gòu)的損壞越嚴(yán)重。4.最后,本實(shí)驗(yàn)在基因水平定量檢測(cè)了投喂蠶豆對(duì)草魚(yú)頭腎和肝臟組織中C型溶菌酶(C-type lysozyme)、白介素1β(IL-1β)、干擾素I型(IFN-I)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、免疫球蛋白M(Ig M)和主要組織相容性復(fù)合體I(MHC-I)6種免疫基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,蠶豆組草魚(yú)頭腎中C-type lysozyme、IFN-I、Ig M和MHC-I的表達(dá)、肝臟中IFN-I、TNF-α、Ig M和MHC-I的表達(dá)在草魚(yú)攝食蠶豆期間顯著下調(diào);在轉(zhuǎn)投飼料30 d后(蠶豆組第150 d時(shí)),除蠶豆組草魚(yú)頭腎C-type lysozyme外,上述蠶豆組草魚(yú)基因的表達(dá)皆呈現(xiàn)回升趨勢(shì)。本研究結(jié)果表明,投喂蠶豆對(duì)草魚(yú)頭腎和肝臟組織中免疫基因的表達(dá)產(chǎn)生了一定的抑制作用,轉(zhuǎn)投飼料30 d后(蠶豆組第150 d時(shí))可以使受到抑制的免疫基因的表達(dá)有所恢復(fù)�？傊�,脆化120 d的草魚(yú),繼續(xù)攝食30 d的人工配合飼料,其肌肉脆化效果并未受到影響。投喂蠶豆后,草魚(yú)腸道菌群多樣性及有益菌數(shù)量減少、血清免疫酶活性受到抑制、免疫相關(guān)組織超微結(jié)構(gòu)損傷、免疫基因的表達(dá)受到抑制,而脆化結(jié)束時(shí)轉(zhuǎn)投人工配合飼料30 d后,脆肉鯇的免疫機(jī)能有所改善。本論文研究結(jié)果為脆肉鯇規(guī)模化集約養(yǎng)殖和降低長(zhǎng)途運(yùn)輸中脆肉鯇的應(yīng)激反應(yīng)提供了科學(xué)指導(dǎo)資料和理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 肌肉的橫切與縱切顯微結(jié)構(gòu)(×400 倍)Fig.1-1 Transection and vertical section of muscle(×400 times))：對(duì)照組橫切；(b)：蠶豆組 30 d 橫切；(c)：蠶豆組 60 d 橫切；(d)：蠶豆組 90 d 橫切；(e)：蠶豆組 12切；(f)：蠶豆組 150 d 橫切；(g)：對(duì)照組縱切；(h)：蠶豆組 30 d 縱切；(i)：蠶豆組 60 d 縱切；(j)：蠶組 90 d 縱切；(k)：蠶豆組 120 d 縱切；(l)：蠶豆組 150 d 縱切(a): Transection of muscle of control; (b): Transection of muscle of broad bean (BB) (30 d); (c): Transection omuscle of BB (60 d); (d): Transection of muscle of BB (90 d); (e): Transection of muscle of BB (120 d); (f):Transection of muscle of BB (150 d); (g): Vertical section of muscle of control; (h): Vertical section of muscle BB (30 d); (i): Vertical section of muscle of BB (60 d); (j): Vertical section of muscle of BB (90 d); (k): Verticasection of muscle of BB (120 d); (l): Vertical section of muscle of BB (150 d).2 不同脆化階段草魚(yú)肌纖維直徑和密度的比較表 1-1 所示，脆化 30 d 時(shí)，蠶豆組草魚(yú)與對(duì)照組草魚(yú)的肌纖維直徑和密度既已存在顯差異(P<0.05)，與對(duì)照組相比，蠶豆組草魚(yú)肌纖維直徑減少了 15.66%(P<0.01)，肌纖維密加了 56.03%(P<0.01)；在蠶豆組草魚(yú)攝食蠶豆期間，每個(gè)脆化階段的肌纖維直徑和密度較一階段都有所增加；脆化 120 d 時(shí)，，蠶豆組草魚(yú)肌纖維直徑比對(duì)照組減少了 28.12%(P<0.0纖維密度增加了 99.14%(P<0.01)；轉(zhuǎn)投飼料 30 d 后(蠶豆組第 150 d 時(shí))的蠶豆組草魚(yú)肌纖徑和密度與脆化 120 d 的蠶豆組草魚(yú)之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖2-2 (a)不同脆化階段草魚(yú)血清堿性磷酸酶活性的變化 (b)不同脆化階段草魚(yú)血清溶菌酶活性的變化 (c)不同脆化階段草魚(yú)血清補(bǔ)體C3含量水平Fig.2-2 (a)The activity of serum alkaline phosphatase of grass carp at different crisping stages (b)The activity ofserum lysozyme of grass carp at different crisping stages (c)The levels of serum complement C3 of grass carp atdifferent crisping stages2.3 草魚(yú)腸道菌群 PCR-DGGE 圖譜構(gòu)建及序列分析2.3.1 基因組 DNA 提取和 PCR 擴(kuò)增提取草魚(yú)腸道微生物總DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后得到23 kb的DNA條帶(如圖 2-3、2-4)，雖出現(xiàn)部分降解，但基本能滿(mǎn)足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需要。圖2-3 不同養(yǎng)殖時(shí)期對(duì)照組草魚(yú)基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖譜Fig.2-3 Agarose gel(1%) electrophoresis of genomic DNA of control group in different times1~3：對(duì)照組30 d；4~6：對(duì)照組60 d；7~9：對(duì)照組90 d；10~12：對(duì)照組120 d；13~15：對(duì)照組150 d。1~3: Control (30 d); 4~6: Control (60 d); 7~9: Control (90 d); 10~12: Control (120 d); 13~15. Control (150 d).
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S965.112

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2666611