發(fā)布時(shí)間：2020-05-14 10:26

【摘要】：色素上皮細(xì)胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)是具有抑制血管增生,神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)保護(hù)以及抗炎等多種功能的蛋白。對(duì)哺乳動(dòng)物的研究顯示PEDF直接參與調(diào)控脂質(zhì)代謝,但其在硬骨魚類上的作用并不明確。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNFα)是機(jī)體內(nèi)重要的細(xì)胞因子,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、凋亡等功能,并參與調(diào)節(jié)肝臟的脂肪變性過程。本研究首次克隆了草魚PEDF基因,采用原核表達(dá)、免疫共沉淀、細(xì)胞培養(yǎng)和在體注射等手段,在細(xì)胞和個(gè)體水平上探討了PEDF的基本特性以及其對(duì)TNFα誘導(dǎo)的草魚肝脂變性的緩解作用與機(jī)制。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.PEDF由409個(gè)氨基酸組成,其DNA包含8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。蛋白質(zhì)N端有一個(gè)信號(hào)肽,C端一個(gè)絲氨酸蛋白酶抑制劑結(jié)構(gòu)域。而細(xì)胞內(nèi)的PEDF定位于細(xì)胞質(zhì),并能與甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)結(jié)合。2.PEDF參與營(yíng)養(yǎng)代謝的調(diào)控過程。PEDF有著廣泛的組織表達(dá),并在脂肪組織中表達(dá)最高。其表達(dá)隨著脂肪細(xì)胞的分化成熟而增加。在體與離體饑餓試驗(yàn)顯示PEDF的表達(dá)均受到影響。油酸與胰島素離體處理肝細(xì)胞后,PEDF的表達(dá)顯著升高。3.PEDF促進(jìn)甘油三酯降解。原核表達(dá)出有活性的PEDF重組蛋白,WB檢測(cè)顯示HIS標(biāo)簽標(biāo)記的外源性的PEDF能夠被細(xì)胞攝取,甘油三酯測(cè)定結(jié)果表明PEDF促進(jìn)甘油三酯降解。4.PEDF可以抑制TNFα誘導(dǎo)的肝脂肪變性,并且PPARα參與了這個(gè)過程的調(diào)節(jié)。在體注射試驗(yàn)以及離體細(xì)胞試驗(yàn)均顯示TNFα促進(jìn)肝細(xì)胞的脂質(zhì)蓄積,同時(shí)PPARα和PEDF的表達(dá)受到抑制。而在加入PPARα激動(dòng)劑或者PEDF重組蛋白之后,由TNFα造成的甘油三酯蓄積得到了緩解,并且PPARα激動(dòng)劑提高了PEDF的表達(dá)水平。本研究表明PEDF減少脂質(zhì)蓄積,并能抑制TNFα誘導(dǎo)的肝脂肪變性,對(duì)維持機(jī)體甘油三酯的穩(wěn)態(tài)有直接作用。
【圖文】：

圖 2-3 PEDF 蛋白結(jié)構(gòu)三維模擬預(yù)測(cè)圖Fig 2-3 Predicted structures of PEDF注：N 端氨基酸被標(biāo)記為黃色，C 端氨基酸被標(biāo)記為綠色。erminal amino acids were labeled as yellow. The C-terminal amino acids we

圖 2-2 PEDF 基因結(jié)構(gòu)示意圖Fig 2-2 Genomic structure of PEDF genes.黑框代表外顯子，陰影部分代表編碼區(qū)，空白區(qū)域代表非編碼區(qū)，內(nèi)含子的長(zhǎng)度的下方，而外顯子的長(zhǎng)度標(biāo)注在上方。ons are represented by boxes; shady areas represent the coding region of the gene. Int
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 杜震宇;;養(yǎng)殖魚類脂肪肝成因及相關(guān)思考[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2014年09期

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本文編號(hào)：2663208