【摘要】：至今為止,已經有大量的研究致力于探索尼羅羅非魚在鹽度應激條件下生理生化水平的變化,但是從免疫學的角度揭示鹽度應激對其產生的影響的研究還十分有限。高滲條件下,有關魚類免疫器官在組織學和轉錄組學等方面的應激應答反應的報道較少。本實驗首先探究了,長期鹽度應激對尼羅羅非魚的兩種免疫器官(脾臟和頭腎)的影響,進行了為期八周的養(yǎng)殖實驗,以淡水為對照組,評估了長期鹽度應激(16psu)對尼羅羅非魚的生長性能、血液免疫指標,以及對兩種免疫器官(脾臟和頭腎)在組織學及轉錄組學的影響。結果顯示,淡水組和鹽度應激組,尼羅羅非魚的增重和特定生長率皆無顯著差異。但鹽度應激(16psu)會引起充血性脾腫大,且血小板和凝血相關的因子在尼羅羅非魚表達顯著減少,紅細胞分布寬度變異系數和平均紅細胞血紅蛋白顯著增加。同時,在尼羅羅非魚脾臟和頭腎的組織切片中,觀察到大量巨噬細胞中心和色素沉積。透射電鏡的結果顯示,鹽度應激(16psu)組同對照組相比,其脾臟和頭腎中有更多含有沉積顆粒的異常巨噬細胞和中性粒細胞。在轉錄組學方面,在脾臟和頭腎中,分別有772和502個基因被標注為顯著差異表達,分別對應5個和1個能顯著改變免疫系統(tǒng)的通路,且鹽度應激(16psu)組脾臟補體通路顯著下調。本研究表明,長期暴露于高滲透環(huán)境下的尼羅羅非魚可誘發(fā)脾腫大,同時凝血功能降低,增強了脾臟的吞噬活性和降低補體通路。隨后,為了進一步探究了鹽度應激下,營養(yǎng)物質β-葡聚糖的免疫營養(yǎng)調控作用,設計了后續(xù)實驗,從生長、組織學、血液學、免疫和生長因子的表達和腸道微生物方面評估了飼料中β-葡聚糖緩解鹽度應激對尼羅羅非魚免疫器官損傷的作用。實驗配制了三種等氮等能的β-葡聚糖飼料,添加水平分別為0%(基礎飼料)、0.2%和0.4%,飽食投喂,以基礎飼料-淡水組與基礎飼料-鹽度應激組(16psu)的尼羅羅非魚為對照,養(yǎng)殖周期為8周。結果顯示,鹽度應激下,不同添加水平的β-葡聚糖,其生長存活皆高于未添加組,與投喂基礎飼料的淡水組的生長存活相比無顯著差異。高鹽度應激下,羅非魚脾臟出現腫大現象,脾臟系數升高(P0.05),脾臟內紅細胞顯著增多,0.2%的β-葡聚糖有緩解脾腫大作用,脾臟系數顯著降低,并與淡水基礎飼料組的脾臟系數無顯著差異。高鹽度應激下,腸道組織出現破壞現象,中腸的小腸絨毛有破碎,杯狀細胞少,而不同添加水平的β-葡聚糖添加組,腸絨毛無破碎,杯狀細胞多,小腸絨毛長,腸絨毛排列緊密,同淡水組腸道組織完整性類似。血液學方面,鹽度應激下,血液中紅細胞RBC、白細胞WBC、血球壓積HCT、平均血紅細胞血紅蛋白濃度MCHC、紅細胞分布寬度變異系數RDW、血小板數目PLT和血小板壓積PCT與淡水組相比皆升高,而飼料中添加β-葡聚糖顯著降低這些血液指標。同時,隨著鹽度應激對羅非魚生長和組織學結構的影響,免疫和生長因子也發(fā)生相應的變化,變化如下:脾臟內,鹽度應激組的巨噬細胞遷移抑制因子MIF-2、轉化生子因子TGF-β1、TNF-α和IL-1的表達升高;而飼料中添加β-葡聚糖能顯著降低MIF-2、TGF-β1、TNF-α表達,而顯著增加IL-1的表達。在腸道內,飼料中添加β-葡聚糖能顯著降低鹽度應激條件下的MIF-2和IL-1β的表達,升高TNF-α的表達,鹽度應激下,添加0.4%β-葡聚糖組TGF-β1也顯著升高。頭腎中,飼料中添加β-葡聚糖能顯著增加鹽度應激條件下的TNF-α的表達(P0.05),0.4%β-葡聚糖能顯著降低鹽度應激條件下的IL-1的表達(P0.05)。腸道菌群作為一種評價健康的指標,為羅非魚免疫研究提供了新方向。結果顯示:鹽度應激能改變腸道菌群結構與豐富度。鹽度應激,屬水平下,一些致病菌豐度增加,如:韋榮球菌屬(Veillonella)、海洋放線菌(Rubrobacter)和暖繩菌(Caldlinea)。一些應激壓力應激的菌也顯著增加,如Gracilibacter菌和Perlucidibaca菌。而一些優(yōu)勢內源菌豐度卻顯著降低,如不動桿菌(Acinetobacter)。飼料中添加不同濃度的β-葡聚糖能顯著改善菌群結構,一些條件致病菌顯著降低,如:假單胞菌(Pseudomonas)、Staphylococcus菌、鏈球菌(Streptococcus)、假單胞菌(Pseudomonas)、棒狀桿菌(Corynebacterium);—些拮抗細菌顯著增加,獨島氏菌(Dokdonella)、棲熱菌(Thermus)、Sphingopyxis菌和嗜鹽細菌(Salinicoccus)也顯著增加。
【圖文】：

紅色部分為紅細胞，羅非魚鹽度應激組對比淡水組的脾紅細胞增多（圖逡逑２．３ａ，Ｃ）。鹽度應激組羅非魚脾臟還現出了明顯的巨噬細胞和大量黑色巨噬細胞中逡逑心（圖２．３ｂ，，Ｄ）。鹽度應激組比淡水組，羅

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