【摘要】：水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展使得水生動(dòng)物細(xì)菌性疾病產(chǎn)生,抗生素的濫用導(dǎo)致多重耐藥性、水體環(huán)境受到污染以及藥物殘留等問(wèn)題。為了改變現(xiàn)狀,開(kāi)發(fā)可以代替抗生素并對(duì)環(huán)境以及動(dòng)物體自身沒(méi)有危害的產(chǎn)品,此時(shí)益生菌的出現(xiàn)緩解了情況。本實(shí)驗(yàn)基于以上想法,從食用魚(yú)腸道分離篩選性狀優(yōu)良的益生性乳菌,為其在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用做基礎(chǔ)工作。本研究對(duì)乳酸菌進(jìn)行初篩,共獲得8株乳酸菌,通過(guò)膽鹽耐受試驗(yàn)、pH值耐受試驗(yàn)、胰蛋白酶耐受試驗(yàn)、高溫耐受試驗(yàn)等,進(jìn)行復(fù)篩,共獲得2株性狀優(yōu)良的菌株:W1和B4在膽鹽濃度為0.3%培養(yǎng)4h后存活率可以達(dá)到60%以上;在酸性和堿性條件下均有很高的存活率;胰蛋白酶對(duì)存活率沒(méi)有影響;可以耐受60℃的溫度,對(duì)70℃具有一定的耐受性。在藥敏試驗(yàn)中可以看出,2株菌株均表現(xiàn)出一定的敏感性。進(jìn)行動(dòng)物安全性試驗(yàn)初步確定2株菌株具有安全性。通過(guò)16s基因測(cè)序以及生理生化試驗(yàn)鑒定W1為棒狀乳桿菌,B4為糞腸球菌。為驗(yàn)證分離得到的乳酸菌在體內(nèi)益生作用,本試驗(yàn)通過(guò)乳酸菌口服免疫鯽魚(yú),共免疫四次,5天為一個(gè)免疫周期。采集0d、7d、14d、21d以及28d的各組織和血清樣本,部分抗凝血做白細(xì)胞吞噬試驗(yàn),其余血清和組織進(jìn)行免疫指標(biāo)的檢測(cè),攻毒試驗(yàn)是對(duì)乳酸菌的保護(hù)效果的評(píng)估。通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中抗體水平,如SOD、ALP、IgM等,結(jié)果表明,在免疫后的鯽魚(yú)血清樣本中檢測(cè)到了較高水平的IgM抗體含量,其余抗體水平均呈上升趨勢(shì),說(shuō)明體液免疫增強(qiáng)。免疫相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果顯示,W1和B4乳酸菌對(duì)鯽魚(yú)主要免疫器官腎臟和肝臟中IL-10、IL-1β、TNF-α、IFN-γ基因表達(dá)量具有加強(qiáng)的作用。免疫過(guò)程中白細(xì)胞吞噬百分比逐漸增強(qiáng),在三免后達(dá)到最大值,四免后稍有下降。腹腔注射嗜水氣單胞菌TPS后,W1和B4可以減緩病原菌的感染,增強(qiáng)保護(hù)率。為乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用做好基礎(chǔ)工作。
【圖文】：

通過(guò)革蘭氏染色在下觀察菌株的形態(tài)，，在顯微鏡下觀察部分菌株菌體形態(tài)如圖 1-1，1-2 所示。J1J2J11C2C3L3B4++++㧟㧟㧟㧟22mm、邊緣整齊光滑桿狀、單獨(dú)存在、無(wú)芽孢同 J1同 J1球形、成對(duì)存在、無(wú)芽孢同 C2同 C2同 C2乳白色、不透明、圓形、邊齊光滑、單菌落很小同 J1同 J1乳白色、不透明、圓形、直約 15mm、邊緣整齊光滑乳白色、半透明、圓形、邊齊光滑、直徑大約 12mm同 C2同 C2

通過(guò)革蘭氏染色在下觀察菌株的形態(tài)，在顯微鏡下觀察部分菌株菌體形態(tài)如圖 1-1，1-2 所示。J1J2J11C2C3L3B4++++㧟㧟㧟㧟22mm、邊緣整齊光滑桿狀、單獨(dú)存在、無(wú)芽孢同 J1同 J1球形、成對(duì)存在、無(wú)芽孢同 C2同 C2同 C2乳白色、不透明、圓形、邊齊光滑、單菌落很小同 J1同 J1乳白色、不透明、圓形、直約 15mm、邊緣整齊光滑乳白色、半透明、圓形、邊齊光滑、直徑大約 12mm同 C2同 C2
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S963.211

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2656632