發(fā)布時間：2020-05-08 07:53

【摘要】：為研究處于同一時期但養(yǎng)殖條件不同的草魚魚體規(guī)格與發(fā)育狀態(tài)間是否具有一致性,本實驗觀察了出膜后開始高密度、低投喂的壓塘3月齡草魚與正常養(yǎng)殖的普通3月齡草魚頭腎、中腎、腸道和脾臟的顯微結構,并對其進行疫苗腹腔注射處理,通過實時熒光定量PCR方法檢測免疫7 d后、14 d后不同規(guī)格魚體的頭腎、中腎、腸道和脾臟中IgM與MHCⅠ的相對表達量,觀察了免疫前后IgM陽性細胞在四個組織當中的分布變化情況,結果顯示:壓塘魚頭腎處于功能多樣的混合型腎臟及分泌組織階段;中腎單位大多還處于發(fā)育中或亞成熟狀態(tài);腸道中可觀察到大量粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞;脾臟已具有一定的免疫功能,但還未未分化為明顯的紅髓和白髓。普通魚頭腎中有大量不規(guī)則分布的淋巴細胞;此時的部分中腎細胞開始表現出與成體相似的細胞形態(tài);腸道粘膜組織中與免疫相關的細胞在數量上也進一步增加;脾臟中可見相互間界限不明的紅髓和白髓混合排列,已具有成熟的組織結構。免疫后草魚IgM在普通魚免疫14 d后的各組織中高表達,其中頭腎(24.07倍,P0.01)、中腎(74.51倍,P0.01)、脾臟(60.31倍,P0.01)中相對表達量比腸道中高很多。并且兩種草魚各自的頭腎、中腎和脾臟中的IgM相對表達量也高于其腸道。頭腎中的MHCⅠ相對表達量在壓塘魚免疫14 d后最高(12.73倍,P0.01);中腎中的表達量在普通魚免疫14 d后最高(56.02倍,P0.01);腸道中的表達量在壓塘魚免疫7 d后最高(2.16,P0.05);脾臟中的表達量在普通魚免疫14 d后最高(12.45,P0.05)。在免疫后的14 d內,壓塘魚MHCⅠ除在頭腎中的相對表達量增幅變大外,中腎、腸道和脾臟中的MHCⅠ相對表達量增幅均有所下降,而普通魚在免疫后的14 d內,各組織中的MHCⅠ相對表達量的增幅都有升高。經草魚出血病活疫苗(GCHV-892株)免疫前IgM陽性細胞在頭腎中數量最多,脾臟和中腎中含量不一,在腸道中幾乎沒有或很少。免疫后各組織中IgM陽性細胞部分出現增多現象,以普通魚免疫14 d后的中腎增幅最大。頭腎和脾臟中的IgM陽性細胞數在普通魚免疫14 d后也都有大幅度增加現象,但腸道中的IgM陽性細胞數在免疫前后的各時期中變化都不大。結果表明,處于同一時期但養(yǎng)殖條件不同的壓塘魚與普通魚間各組織發(fā)育狀況存在較大差異,魚體規(guī)格與發(fā)育狀況具有一致性,正常養(yǎng)殖的普通魚各免疫相關組織發(fā)育相對成熟,可以進行免疫。
【圖文】：

圖 2-1. IgM 與 MHCⅠ在不同組織中的相對表達量Figure 2-1. The expression of IgM and MHCⅠin different tissues.a.壓塘魚免疫7 d 后 IgM 在各組織中的表達量 b.壓塘魚免疫 7 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達量c.壓塘魚免疫14 d 后 IgM 在各組織中的表達量 d.壓塘魚免疫14 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達量 e.普通魚免疫 7 d 后IgM 在各組織中的表達量 f.普通魚免疫 7 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達量 g.普通魚免疫 14 d 后 IgM 在各組織中的表達量 h.普通魚免疫 14 d 后 MHCⅠ在各組織中的表達量(“*”表示差異顯著，“**”表示差異極顯著) a. The expression of IgM in different tissues ondays 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp. b.The expression ofMHCⅠin different tissues on days 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grasscarp. c. The expression of IgM in different tissues on days 14 after injection of high-density,low-feeding 3-month-old grass carp. d.The expression of MHCⅠin different tissues on days 14 afterinjection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp.e. The expression of IgM in differenttissues on days 7 after injection of common 3-month-old grass carp. f. The expression of MHCⅠindifferent tissues on days 7 after injection of common 3-month-old grass carp. g. The expression ofIgM in different tissues on days 14 after injection of common 3-month-old grass carp. h. Theexpression of MHCⅠin different tissues on days 14 after injection of common 3-month-old grasscarp.(“*”：P＜0.05，“**”：P＜0.01)

圖 3-1.各組織中 IgM 陽性細胞密度Figure 3-1. The density of positive cells of IgM in different tissues.Ⅰ7 代表壓塘魚免疫 7 d 后,Ⅰ14 代表壓塘魚免疫 14 d 后,Ⅱ7 代表普通魚免疫 7 d 后,Ⅱ14 代表普通魚免疫 14 d 后.Ⅰ7 for days 7 after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp, Ⅰ14 for days 14after injection of high-density, low-feeding 3-month-old grass carp,Ⅱ7 for days 7 after injection ofcommon 3-month-old grass carp,Ⅱ14 for days 14 after injection of common 3-month-old grass carp.4 討論本實驗利用免疫組化技術對 B 淋巴細胞所特有的免疫球蛋白 M（IgM）進行了定位和定量，觀察發(fā)現：在未經免疫的壓塘魚和普通魚中，IgM 陽性細胞在頭腎中數量最多，脾臟和中腎次之，在腸道中幾乎沒有或很少。說明草魚頭腎是主要的免疫器官，而中腎和脾臟是次級免疫器官，這與雷雪彬[153]對草魚免疫細胞的觀察結果是一致的。腸道后段雖已證具有免疫功能，但作用不明顯。經草魚出血病活疫苗(GCHV-892 株)注射免疫后的草魚各組織中，IgM 陽性細胞多表現出數量增多現象，其中以普通魚免疫 14 d 后的中腎增幅最大。頭腎和脾臟中的 IgM 陽性
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

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