【摘要】：在養(yǎng)殖中不可避免地直接或間接使用過(guò)抗菌藥物,如此養(yǎng)殖出來(lái)的水產(chǎn)品往往攜帶耐藥細(xì)菌,不僅削弱抗菌藥物對(duì)動(dòng)物細(xì)菌性疾病的控制效果,且還存在向人類致病菌傳播耐藥性的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本文研究美洲鰻鱺及其養(yǎng)殖水體分離耐藥細(xì)菌,并分析耐藥細(xì)菌的種屬組成、耐藥性、特定耐藥基因及耐藥整合子,進(jìn)而利用傳代實(shí)驗(yàn)研究細(xì)菌耐藥性的消除。經(jīng)抗性平板篩選出108株耐藥菌,由16S rDNA鑒定屬于4綱20個(gè)屬,γ-變形菌綱的氣單胞菌屬(24.1%)、檸檬酸桿菌屬(17.6%)和不動(dòng)桿菌屬(16.7%)的出現(xiàn)頻率最高。對(duì)17種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,108株耐藥菌株對(duì)阿莫西林的耐藥率高達(dá)90.7%,對(duì)四環(huán)素、抗葉酸類、酰胺醇類、利福平類的耐藥率也在60%~80%之間。93.5%(101/108)的菌株對(duì)3種及以上的藥物具有抗性,其中有兩株對(duì)13種抗菌藥具有抗性,兩株對(duì)14種抗菌藥具有抗性。美洲鰻鱺的腸道、表皮、鰓部及水樣分離菌株的多重耐藥指數(shù)中水樣的最高。分離菌株數(shù)較多菌屬中檸檬酸桿菌屬和克雷伯菌屬的耐藥水平最高,而不動(dòng)桿菌屬則相對(duì)較低。對(duì)29種抗性基因的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,耐藥菌株中耐β-內(nèi)酰胺類藥物的基因blaTEM檢出率高達(dá)100%,耐藥基因tetC和sulI的檢出率也高達(dá)96.3%。其次,aadA和floR的檢出率分別為74.1%和69.4%,qnrB、arr2/3的檢出率在50%左右。此外,在本研究中,所有菌株至少檢測(cè)到兩種抗性基因,其中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)C11檢測(cè)到18種抗性基因。108株耐藥菌株中86株含有Ⅰ型整合子,10株攜帶Ⅱ型整合子,沒(méi)有檢測(cè)到Ⅲ型整合子。10株攜帶Ⅱ型整合子的菌株均同時(shí)攜帶Ⅰ型整合子。Ⅰ型整合酶陽(yáng)性菌株有74株成功擴(kuò)增可變區(qū),其中33株攜帶空整合子,另外41株菌的整合子共含有14種不同基因盒排列。包括一種新的基因盒排列:dfrB4-catB3-blaOXA-10-aadA1,基因盒排列dfrA12-orfF-aadA2分布最為廣泛�；蚝信帕兄袃�(yōu)勢(shì)基因盒為dfr和aad基因家族。10株int Ⅲ陽(yáng)性菌株全部都擴(kuò)增出可變區(qū),均含有相同的基因盒排列dfrA1-catB2-sat2-aadA1。耐藥菌株T4以空白MH肉湯進(jìn)行傳代培養(yǎng),隨著代數(shù)的累加,對(duì)TET耐藥的菌群比例迅速下降。紫外照射不影響T4菌株耐藥性。而低濃度TET和37℃高溫實(shí)驗(yàn)組傳代子的耐藥率基本保持在100%,這意味著低濃度抗生素和高溫等逆境可以保持細(xì)菌耐藥性的穩(wěn)定。此外SDS的存在也不利于T4耐藥性的消除。T4原代所攜帶的基因中,經(jīng)PCR擴(kuò)增檢測(cè)到strA/B、aphA1和blaTEM基因在耐藥性消除菌株中仍然穩(wěn)定存在未被消除,而tetD、floR、dfrA12和Ⅰ型整合子均消除未見(jiàn)。本研究分析了美洲鰻鱺養(yǎng)殖生態(tài)群落中耐藥菌的多樣性、種屬分布以及多重耐藥情況;補(bǔ)充了美洲鰻鱺動(dòng)物源細(xì)菌在抗性基因和整合子研究方面的匱乏和不足;同時(shí)研究了耐藥性消除的影響因素,以探索消除細(xì)菌耐藥性的可能途徑。
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圖 1-1 典型 I 型整合子的結(jié)構(gòu)Figure 1-1 Typical structure of class I integronII 型整合子常見(jiàn)于 Tn7 及其相關(guān)轉(zhuǎn)座子上。II 型整合子基因被一個(gè)終止子阻斷而為缺陷型基因，較少表達(dá)。II 型整合酶基因 intIII 編碼 318 個(gè)氨基酸，，與 I 型整合酶有 46%的同源性。II型整合子3

本文編號(hào)：2647604