【摘要】：蘭州鲇(Silurus lanzhouensis)又名黃河鲇,是黃河上游特有的大型經(jīng)濟(jì)魚類。營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,具有十分廣闊的養(yǎng)殖前景。近些年來(lái),由于水體污染、過(guò)度捕撈、綜合水利工程建設(shè)等因素,蘭州鲇野生種群數(shù)量急劇下降,已成為深受各界關(guān)注的瀕危物種。因此,尋求有效的遺傳標(biāo)記對(duì)蘭州鲇種質(zhì)資源保護(hù)利用、遺傳圖譜構(gòu)建、經(jīng)濟(jì)性狀的QTL定位以及分子標(biāo)記輔助育種是十分必要的。本次實(shí)驗(yàn)分別進(jìn)行了蘭州鲇多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記篩選及與其生長(zhǎng)相關(guān)性分析兩部分,以下是實(shí)驗(yàn)主要內(nèi)容:1.應(yīng)用FIASCO(Fast Isolation by AFLP of Sequences Comaining Repeats)方法構(gòu)建了蘭州鲇(AC)n、(AG)n、(ATC)n、(CAG)n、(AAAC)n、(AGAT)n和(GATA)n核心序列G-SSR(基因組微衛(wèi)星)富集文庫(kù)。結(jié)果獲得326條G-SSR,(GenBank登陸號(hào):KJ008462-KJ008582,KJ545973-KJ545998,KJ598088-KJ598120,KP280324-KP280469)陽(yáng)性序列率為40.75%。其中,完美型微衛(wèi)星170條,占52.15%;非完美型微衛(wèi)星72條,占22.09%;復(fù)合型84條,占25.76%;重復(fù)次數(shù)主要分布在10~20次,重復(fù)次數(shù)在30次以下的比例為80.16%。結(jié)果表明,經(jīng)優(yōu)化的磁珠富集法可以更高效的構(gòu)建蘭州鲇G-SSR文庫(kù)。2.基于公共數(shù)據(jù)庫(kù)GenBank,以現(xiàn)有鲇形目中與蘭州鲇親緣關(guān)系較近的革胡子鲇科和鲇科ESTs(Expressed Sequence Tag)共2002條序列,篩選蘭州鲇E-SSR(表達(dá)標(biāo)簽序列微衛(wèi)星)分子標(biāo)記。結(jié)果共發(fā)現(xiàn)209個(gè)微衛(wèi)星序列,占ESTs數(shù)據(jù)庫(kù)的10.44%;其中三堿基重復(fù)為主導(dǎo)型,共76個(gè)(36.36%),其次是二堿基重復(fù)序列59個(gè)(28.22%)、四堿基重復(fù)序列52個(gè)(24.88%)、五堿基重復(fù)序列17個(gè)(8.13%)、六堿基重復(fù)序列5個(gè)(2.41%);而雙堿基重復(fù)中TG/CA形式最為主,三堿基重復(fù)中AAT/ATT/TAA/TTA/ATA/TAT形式最為主,四堿基重復(fù)中AAAC/GTTT形式最為主,分別占其特征微衛(wèi)星序列總數(shù)的32.79%、47.37%和24.53%。結(jié)果表明,借用已有鲇形目魚類ESTs數(shù)據(jù)庫(kù)可以更高效、快捷的篩選蘭州鲇E-SSR分子標(biāo)記。3.根據(jù)側(cè)翼序列,設(shè)計(jì)G-SSR和E-SSR引物共200對(duì),在蘭州鲇30個(gè)個(gè)體間進(jìn)行多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記篩選,結(jié)果顯示138對(duì)引物能穩(wěn)定擴(kuò)增,57對(duì)引物具有多態(tài)性,每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)2~9個(gè)(平均3.965),觀測(cè)雜合度(Ho)0.0972~0.7326(平均0.4601),期望雜合度(He)0.0881~0.7298(平均0.4963),多態(tài)信息含量(PIC)0.1148~0.7945(平均0.4426),結(jié)果表明,本次篩選到的57個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記遺傳信息含量較豐富;并驗(yàn)證了在蘭州鲇上完美型微衛(wèi)星的多態(tài)性顯著的高于非完美型和混合型微衛(wèi)星(P0.01)。4.采用SPSS 18.0軟件中卡方檢驗(yàn),初步篩選蘭州鲇生長(zhǎng)相關(guān)性微衛(wèi)星標(biāo)記。結(jié)果表明,有17個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在極大群體和極小群體的基因型分布趨向差異顯著。在隨后的表型數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析,有10個(gè)位點(diǎn)分別與體重、體長(zhǎng)、體高相關(guān),其中,SLsis10、SLsis26、SLsis46、SLsis76、SLsis89、SLsis112和SLsis120這7位點(diǎn)與體重顯著相關(guān)(P0.05或P0.01);SLsis2、SLsis3和SLsis249這3個(gè)位點(diǎn)與體長(zhǎng)顯著相關(guān)(P0.05或P0.01);SLsis89與體重、體長(zhǎng)顯著相關(guān),而與體高相關(guān)性不顯著。SLsis26、SLsis46和SLsis120與體重、體長(zhǎng)和體高顯著相關(guān)(P0.05)。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2645817