【摘要】：鯉春病毒血癥(Spring viremia of carp,SVC)是一種急性出血性高度傳染性的病毒病,一般在春季大規(guī)模爆發(fā),主要感染鯉科魚類,其中以鯉為主要感染對(duì)象�；疾〉挠佐~死亡率高達(dá)30%-70%,是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的必須申報(bào)的動(dòng)物疫病。該病最早在歐洲爆發(fā),并引起了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。雖然目前,在我國該病還沒有大規(guī)模爆發(fā)的報(bào)道。但已有相關(guān)文獻(xiàn)指出,在中東、美國、巴西、加拿大以及我國均有檢測(cè)到SVC的病原鯉春病毒血癥病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)。為了更清楚的了解SVCV致病機(jī)制,為該病的預(yù)防和治療奠定良好基礎(chǔ),本研究主要做了以下兩方面工作:1.SVCV M單克隆抗體的制備利用PCR方法擴(kuò)增SVCV基質(zhì)蛋白M的ORF區(qū),將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至原核表達(dá)載體pGEX-KG中,構(gòu)建重組質(zhì)粒SVCV-M-KG。原核表達(dá)SVCV/M-KG融合蛋白,并用純化的融合蛋白免疫4周齡BALB/c雌鼠,4次免疫后,在融合劑聚乙二醇的作用下,將小白鼠的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合,并最終篩選出1株單克隆抗體5A1。間接免疫熒光和免疫印記實(shí)驗(yàn)證明該抗體可以特異性識(shí)別SVCV/M蛋白,進(jìn)一步分析得知,該抗體與M蛋白的相互作用位點(diǎn)位于M基因第337bp至522bp之間。對(duì)所獲得單克隆抗體進(jìn)行亞型分析可知,其屬于IgG2b亞型,輕鏈為κ鏈。2.鯉天然免疫蛋白TRIM32初步研究參照斑馬魚、羅非魚等已知的TRIM32基因序列,設(shè)計(jì)隨機(jī)引物擴(kuò)增鯉TRIM32基因核心片段,通過RACE方法進(jìn)一步獲得鯉TRIM32 ORF區(qū),并對(duì)該序列進(jìn)行同源性、遺傳進(jìn)化等生物學(xué)分析。最終結(jié)果顯示,鯉TRIM32具有較高的保守性,其與模式生物斑馬魚的同源性為93%,遺傳進(jìn)化樹分析將斑馬魚和鯉的TRIM32聚為一支。SVCV M蛋白單克隆抗體和TRIM32蛋白初步研究,為進(jìn)一步研究SVCV的致病機(jī)理和防治方法奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

單克隆抗體的產(chǎn)生Fig1：Theproductionofmonoclonalantibodies(來自互聯(lián)網(wǎng))

圖 2:TRIM 蛋白結(jié)構(gòu)域組成Fig2:The domains of TRIM proteinsRicardo Rajsbaum et al.,2014Ricardo Rajsbaum et al.,2014圖 3:TRIM 蛋白 E3 泛素連接酶活性Fig3:TRIM proteins as E3 Ubiquitligase
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S943

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 孔君;劉箐;韓躍武;王天昌;劉金芝;;單克隆抗體制備技術(shù)的最新進(jìn)展及應(yīng)用前景[J];免疫學(xué)雜志;2011年02期

2 王傳武,趙德明;用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備多克隆抗體Ⅰ.免疫方案的優(yōu)化[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2002年04期

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本文編號(hào)：2644400