【摘要】：草魚為我國(guó)主要的淡水養(yǎng)殖魚類,但其種質(zhì)資源隨著大規(guī)模的人工養(yǎng)殖在逐漸退化,因此對(duì)草魚進(jìn)行有計(jì)劃、科學(xué)的人工選育是非常必要的,本研究對(duì)草魚的生長(zhǎng)和抗病的相關(guān)遺傳參數(shù)進(jìn)行基礎(chǔ)研究分析,通過(guò)對(duì)草魚一齡前不同生長(zhǎng)階段性狀之間的相關(guān)性分析、4月齡草魚生長(zhǎng)性狀及抗病力的遺傳力研究、LEAP-2基因的SNPs與草魚生長(zhǎng)和抗病力的關(guān)聯(lián)分析以及草魚生長(zhǎng)和抗病力的初步QTL定位分析。以期為草魚的育種研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。研究的結(jié)果如下:1.草魚一齡前不同月齡主要形態(tài)性狀對(duì)體質(zhì)量的影響效果對(duì)2月齡,4月齡,6月齡,12月齡的草魚主要形態(tài)性狀包括體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高和體寬進(jìn)行連續(xù)測(cè)量。采用相關(guān)分析,通徑分析和多元回歸分析計(jì)算獲得各性狀與體質(zhì)量的相關(guān)系數(shù)、通徑系數(shù)和決定系數(shù)參數(shù)。相關(guān)分析結(jié)果顯示草魚各月齡主要形態(tài)性狀均與體質(zhì)量呈現(xiàn)極顯著的相關(guān)(P0.01)。通徑分析結(jié)果顯示2月齡體高對(duì)體質(zhì)量直接作用最大,體寬對(duì)體質(zhì)量的間接作用最大;4月齡體長(zhǎng)對(duì)體質(zhì)量直接影響最大,體寬對(duì)體質(zhì)量的間接作用最大;6月齡體高對(duì)體質(zhì)量直接作用最大,體寬對(duì)體質(zhì)量的間接作用最大;12月齡體長(zhǎng)對(duì)體質(zhì)量直接作用最大,體寬對(duì)體質(zhì)量的間接作用最大;同時(shí)決定程度分析結(jié)果與通徑分析結(jié)果是一致的。偏回歸系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果表明體長(zhǎng),體高和體寬均可引入并建立以體長(zhǎng)、體高、體寬為自變量,體質(zhì)量為因變量的回歸方程。各月齡研究結(jié)果表明草魚不同生長(zhǎng)階段影響體質(zhì)量的主要性狀不盡相同,2月齡和6月齡對(duì)體質(zhì)量影響最大的性狀為體高,4月齡和12月齡對(duì)體質(zhì)量影響最大的性狀為體長(zhǎng)。4月齡和12月齡的調(diào)整決定系數(shù)R2大于0.85,表明4月齡和12月齡影響體質(zhì)量的主要性狀確定為體長(zhǎng)。2.4月齡草魚生長(zhǎng)性狀和抗病力遺傳參數(shù)估計(jì)及家系對(duì)比分析對(duì)4月齡草魚的混合家系,進(jìn)行親子鑒定,確定家系信息,利用生長(zhǎng)數(shù)據(jù)和家系信息對(duì)4月齡草魚生長(zhǎng)性狀和抗病力的遺傳參數(shù)進(jìn)行估計(jì),同時(shí)對(duì)不同家系的生長(zhǎng)和抗病性進(jìn)行對(duì)比。本研究通過(guò)8對(duì)微衛(wèi)星對(duì)1047個(gè)個(gè)體進(jìn)行親子鑒定,使用Genemapper Version 4.0軟件讀取微衛(wèi)星STR分型數(shù)據(jù),利用Cervus 3.0軟件對(duì)1047個(gè)子代個(gè)體進(jìn)行親權(quán)鑒定回建家系,結(jié)果為972個(gè)個(gè)體確定了其父本信息,確定率達(dá)到92.84%。根據(jù)親子鑒定的結(jié)果獲得了來(lái)自22個(gè)母本和23個(gè)父本的237個(gè)全同胞家系,其中92個(gè)全同胞家系包含了779個(gè)子代個(gè)體,每個(gè)家系的子代個(gè)體數(shù)在3-89之間。4月齡草魚的體質(zhì)量的遺傳力為0.3464,體長(zhǎng)的遺傳力為0.3313,體高的遺傳力為0.3045,體寬的遺傳力為0.3033和抗病存活時(shí)間的遺傳力為0.0597。因此4月齡草魚的體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高和體寬的均大于0.3為高遺傳力,均可以穩(wěn)定的遺傳給下一代;4月齡草魚抗病存活時(shí)間的遺傳力小于0.15為0.0597,屬于低遺傳力。4月齡草魚的體長(zhǎng)與體質(zhì)量的遺傳相關(guān)和表型相關(guān)最大分別為0.9856和0.9766,而體長(zhǎng)與存活時(shí)間的遺傳相關(guān)和表型相關(guān)分別為0.3482和0.3463。性狀間的遺傳相關(guān)系數(shù)是制定目標(biāo)性狀的重要依據(jù),對(duì)于抗病存活時(shí)間的遺傳力為低等遺傳力水平,因此在對(duì)抗病性能進(jìn)行選育時(shí)可以通過(guò)對(duì)體長(zhǎng)的間接選育或分子標(biāo)記來(lái)輔助育種來(lái)達(dá)到育種的目標(biāo)。同時(shí)生長(zhǎng)性能好的家系和存活時(shí)間長(zhǎng)以及存活率高的家系是有交叉的,主要是48號(hào)家系和54號(hào)家系,這兩個(gè)家系的父母本分別為F97832和M51696、F51566和M97893,同時(shí)生長(zhǎng)性能指標(biāo)較低的家系也存在交叉為72號(hào)和84號(hào)家系,這兩個(gè)家系的父母本分別為F51593和M51341、F97808和M97846。因此對(duì)親本的合理選擇和淘汰為草魚良種抗病群體的建立提供一個(gè)新的方法。3.草魚LEAP-2基因全序列SNPs與生長(zhǎng)及抗病性能的關(guān)聯(lián)性分析對(duì)草魚LEAP-2基因全序列SNPs與生長(zhǎng)及抗病性能的相關(guān)性進(jìn)行分析。選擇規(guī)格相同的1000尾4月齡草魚進(jìn)行嗜水氣單胞菌攻毒實(shí)驗(yàn)并記錄存活時(shí)間和主要生長(zhǎng)數(shù)據(jù),選取192尾存活個(gè)體和192尾死亡個(gè)體,提取DNA。根據(jù)LEAP-2基因全長(zhǎng)設(shè)計(jì)兩對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采用直接測(cè)序法獲得PCR產(chǎn)物的序列信息,經(jīng)過(guò)序列比對(duì)分析,獲得2個(gè)SNPs位點(diǎn),Site01:631(AGAGAGAGAGAGAGAGAA/-)位于LEAP-2基因的轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游717bp的調(diào)控序列中,其野生型DD基因型個(gè)體的存活率比突變型II基因型和雜合型DI基因型的低。而野生型DD基因型的生長(zhǎng)指標(biāo)均值比突變型II基因型和雜合型DI基因型的高。Site01的不同基因型的存活率存在極顯著差異(P0.01),除體長(zhǎng)外的其他生長(zhǎng)指標(biāo)平均值存在顯著的差異(P0.05);Site02:1738(CA/-)位于LEAP-2基因的第二個(gè)內(nèi)含子中,其雜合型DI基因型個(gè)體的存活率比野生型II基因型高,同時(shí)雜合型DI基因型個(gè)體的生長(zhǎng)指標(biāo)均值比野生型II基因型的高。Site02的不同基因型的存活率存在極顯著差異(P0.01),生長(zhǎng)指標(biāo)平均值除體長(zhǎng)外存在顯著差異(P0.05);由Site01和Site02組成的5種雙倍型中,不同雙倍型個(gè)體的存活率之間存在極顯著的差異(P0.01),生長(zhǎng)指標(biāo)平均值均存在極顯著差(P0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明草魚LEAP-2基因的2個(gè)SNPs與草魚的生長(zhǎng)及抗病性能存在顯著的相關(guān)性,因此可以將這兩個(gè)SNPs作為分子標(biāo)記用于草魚的分子標(biāo)記輔助育種研究上,進(jìn)行生長(zhǎng)和抗病選育。4.草魚生長(zhǎng)和抗病性狀的QTL初步定位利用本實(shí)驗(yàn)已開(kāi)發(fā)的微衛(wèi)星等分子標(biāo)記進(jìn)行遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建,并對(duì)相關(guān)的生長(zhǎng)性狀和抗病力進(jìn)行初步的QTL定位分析。本研究發(fā)現(xiàn)了7個(gè)QTLs與草魚體質(zhì)量緊密相關(guān),8個(gè)QTLs與草魚體長(zhǎng)相關(guān),4個(gè)QTLs與草魚體高相關(guān),8個(gè)QTLs與草魚體長(zhǎng)相關(guān)和4個(gè)與草魚抗病力相關(guān)的QTLs。在已有報(bào)道的對(duì)經(jīng)濟(jì)性狀QTL定位研究的結(jié)果中發(fā)現(xiàn),如果QTL區(qū)間所能解釋的表型變異超過(guò)20%,則該QTL區(qū)間即為該性狀的主效QTL區(qū)間;Group 19(CID0202-CID0513/CID1536)、Group 2(CID0223-CID0131A)、和Group 24(CID0856-CID1534)可解釋的表型變異分別為28.8%、25.2%、23.1%,是與體質(zhì)量顯著相關(guān)的主效QTL區(qū)間;Group 19(CID0202-CID0513/CID1536)和Group 24(CID0856-CID1534)可解釋的表型變異分別為29.1%、23.7%,是與體長(zhǎng)顯著相關(guān)的主效QTL區(qū)間;Group 21(CID1114-CID0382)和Group24(CID0856-CID1534)可解釋的表型變異分別為24.2%、23.1%,是與體寬顯著相關(guān)的主效QTL區(qū)間;Group 8(CID0257-EST0006)、Group 19(CID0202-CID0513/CID1536)和Group 24(CID0856-CID1435)可解釋的表型變異分別為32.2%、34.9%、30.7%,是與抗病力顯著相關(guān)的主效QTL區(qū)間。本研究中所檢測(cè)到的的15個(gè)QTL,置信區(qū)間為3-30c M,小于10c M的有7個(gè),同時(shí)CID0223-CID0131A、CID0202-CID0513/CID1536和CID0856-CID1435又是與體質(zhì)量,體長(zhǎng)和體寬性狀緊密連鎖的主效QTL區(qū)間,利用這些與性狀和抗病力緊密連鎖的QTLs標(biāo)記時(shí)對(duì)多個(gè)性狀進(jìn)行改良達(dá)到提高選育效果目的,這也為草魚的進(jìn)一步選育提供了依據(jù)。本研究對(duì)草魚一齡前不同生長(zhǎng)時(shí)期的性狀相關(guān)性分析獲得4月齡和12月齡影響體質(zhì)量的主要性狀;并對(duì)4月齡草魚的遺傳力等相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了分析并得到了主要性狀和抗病力的遺傳力;同時(shí)對(duì)草魚LEAP-2基因的SNPs進(jìn)行了篩選,分析其與性狀和抗病力之間的關(guān)聯(lián)性;并對(duì)相關(guān)的性狀和抗病力進(jìn)行了初步的QTL定位分析。以上研究結(jié)果為草魚的間接選擇和分子標(biāo)記輔助育種提供了充分的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
【圖文】：

不同月齡性狀平均增長(zhǎng)率

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文系，，這 1047 個(gè)子代個(gè)體分別來(lái)自于 23 個(gè)父本和 22 個(gè)母本的不同組合，1047 個(gè)個(gè)體中有 779 個(gè)子代個(gè)體來(lái)自其中的 92 個(gè)全同胞家系，各家系中的子代個(gè)體數(shù)最少的為 3 個(gè)，最多的為 89 個(gè)；圖 3-1 中列出了 92 個(gè)家系的子代數(shù)目。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2640021