【摘要】：本論文共分三部分:第一部分將引起俄羅斯鱘性腺潰爛病的兩種致病菌嗜水氣單胞菌與魯氏耶爾森菌制備成二聯(lián)滅活疫苗,探討其對(duì)受免俄羅斯鱘的免疫效果,為以后生產(chǎn)實(shí)踐中疫苗的開發(fā)打下基礎(chǔ);第二部分在俄羅斯鱘基礎(chǔ)飼料中添加免疫多糖---殼聚糖,研究其對(duì)俄羅斯鱘生長(zhǎng)性能與免疫功能的影響;第三部分針對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)突發(fā)疾病膿包病,找到其致病因子,從分子生物學(xué)的角度鑒定它為溫和氣單胞菌,并對(duì)其做了藥物敏感性試驗(yàn),豐富了鱘疾病理論知識(shí),對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐也有一定的借鑒作用。1 嗜水氣單胞菌與魯氏耶爾森菌二聯(lián)滅活疫苗對(duì)俄羅斯鱘的免疫效果研究用嗜水氣單胞菌與魯氏耶爾森菌制成二聯(lián)滅活疫苗,以腹腔注射的方式免疫俄羅斯鱘后,通過檢測(cè)免疫俄羅斯鱘血清超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性、補(bǔ)體C3含量、IgM含量、抗體效價(jià)及對(duì)嗜水氣單胞菌、魯氏耶爾森菌攻毒的免疫保護(hù)率,評(píng)價(jià)該二聯(lián)滅活疫苗對(duì)俄羅斯鱘的免疫保護(hù)效果。結(jié)果顯示,二聯(lián)滅活疫苗免疫俄羅斯鱘后,血清超氧化物歧化酶活力、溶菌酶活力、補(bǔ)體C3含量及IgM含量相比對(duì)照組都有不同程度的升高,且添加佐劑的二聯(lián)滅活疫苗免疫效果更強(qiáng)。二聯(lián)滅活疫苗誘導(dǎo)的抗體效價(jià)在一免后的第2周達(dá)到峰值,隨后有所下降,加強(qiáng)免疫后抗體效價(jià)在第5周再次達(dá)到峰值,且添加佐劑的二聯(lián)滅活疫苗組誘導(dǎo)的抗體效價(jià)高于未添加佐劑的二聯(lián)滅活疫苗組,而空白對(duì)照組在整個(gè)試驗(yàn)期間對(duì)兩種菌的抗體效價(jià)一直小于4。免疫56天后,分別用兩種病原菌攻毒,佐劑二聯(lián)滅活疫苗對(duì)嗜水氣單胞菌與魯氏耶爾森菌的免疫保護(hù)率分別為61.54%、60.71%,與無佐劑組相比,分別提高7.69%、7.14%。試驗(yàn)結(jié)果表明,該二聯(lián)滅活疫苗對(duì)引起俄羅斯鱘性腺潰爛病的兩種細(xì)菌可起到一定的預(yù)防效果。2 殼聚糖對(duì)俄羅斯鱘生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響在基礎(chǔ)飼料中分別添加濃度為0(對(duì)照組)、1.25、2.5、5、7.5、10 g/kg的殼聚糖,投喂12 g左右的俄羅斯鱘50d,每組設(shè)3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)30尾,研究不同濃度的殼聚糖對(duì)俄羅斯鱘(Acipenser gueldenstaedti)幼魚的生長(zhǎng)性能及免疫力的影響。結(jié)果表明,相比對(duì)照組,添加2.5 g/kg、5 g/kg的殼聚糖可顯著降低飼料系數(shù)、提高俄羅斯鱘幼魚的增重率和特定生長(zhǎng)率,(P0.05),而當(dāng)添加量超過10 g/kg時(shí)會(huì)抑制其生長(zhǎng)(P0.05);1.25 g/kg組與2.5 g/kg組血清超氧化物歧化酶活性顯著高于對(duì)照組(P0.05),其它試驗(yàn)組則顯著低于對(duì)照組(P0.05);2.5 g/kg與5 g/kg組溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組,當(dāng)殼聚糖添加量超過7.5 g/kg時(shí)則會(huì)抑制血清溶菌酶活性(P0.05);1.25 g/kg~5 g/kg組酸性磷酸酶活性、堿性磷酸酶活性和補(bǔ)體C3含量都顯著高于對(duì)照組(P0.05);各試驗(yàn)組IgM含量不受殼聚糖含量的影響,與對(duì)照組差異不顯著(P0.05)。在本試驗(yàn)條件下,添加適量的殼聚糖能提高俄羅斯鱘幼魚的生長(zhǎng)性能,增強(qiáng)其免疫能力,綜合評(píng)價(jià)增重率、特定生長(zhǎng)率及非特異性免疫等指標(biāo),殼聚糖添加量以2.5 g/kg為宜。3 鱘膿包病病原的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)從瀕死的鱘魚身上分離到3株優(yōu)勢(shì)菌株,命名為BX0814、BX0815、BX0816,回歸感染健康試驗(yàn)鱘,發(fā)現(xiàn)BX0815有致病性,且試驗(yàn)鱘發(fā)病癥狀與自然發(fā)病鱘癥狀相似,并從試驗(yàn)鱘體內(nèi)再次分離到此菌,說明BX0815為致病菌。通過對(duì)此致病菌的形態(tài)學(xué)、生理生化特征、分子生物學(xué)以及藥敏特性分析,結(jié)果顯示BX0815為革蘭氏陰性菌,其16S r DNA的序列與溫和氣單胞菌(GenBank登錄號(hào):FJ461353.1)的同源性高達(dá)100%;經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn),BX0815菌株與溫和氣單胞菌FJ461353.1自然聚類為一支,進(jìn)一步表明BX0815菌株為溫和氣單胞菌。藥敏特性試驗(yàn)結(jié)果顯示,諾氟沙星、慶大霉素、氟苯尼考等15種藥物對(duì)菌株BX0815有很好的抑菌效果。由試驗(yàn)結(jié)果分析可知,引起鱘魚患膿包病癥的病原是溫和氣單胞菌,病原菌的鑒定及其藥敏試驗(yàn)結(jié)果為鱘魚養(yǎng)殖過程中,合理選擇藥物防治疾病提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 血清中超氧化物歧化酶的活力Fig. 1-1 Activity of SOD in serum注：相同時(shí)間，，肩注不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05)，肩注不同大寫字母表示差異極著（P<0.01)，肩注相同表示差異不顯著（P>0.05)，下同。Note: In the same time, different small letters superscripts means significant difference (P<0.0

圖 1-2 血清中溶菌酶的活力Fig.1- 2 Activity of lysozyme in serum2.3 血清補(bǔ)體 C3 的含量從圖 1-3 看出，在免疫不同時(shí)間后，免疫組的俄羅斯鱘血清補(bǔ)體 C3 含量均有
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S943

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本文編號(hào)：2639966