【摘要】：文蛤(Meretrix meretrix)是我國沿海廣泛分布的重要經(jīng)濟(jì)貝類,由于其肉嫩味鮮和營養(yǎng)豐富的特點,有“天下第一鮮”的美稱,深受國內(nèi)外消費者的歡迎,是我國大宗出口的鮮活水產(chǎn)品之一。目前文蛤良種培育采用傳統(tǒng)的選擇育種,為加快培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、抗逆性強(qiáng)的文蛤新品種,開展文蛤生長、發(fā)育等相關(guān)功能基因的生長調(diào)控機(jī)制的研究對開發(fā)分子標(biāo)記輔助選擇育種技術(shù)具有重要意義,能加快縮短育種周期,促進(jìn)文蛤養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本研究依據(jù)文蛤轉(zhuǎn)錄組文庫注釋信息克隆了 3個生長相關(guān)基因:BMP2、BMP7和TGF-βR1基因,并對BMP2和BMP7基因的時空表達(dá)和生長相關(guān)性SNP位點進(jìn)行了相關(guān)的研究,對TGF-βR1基因的外顯子篩選生長相關(guān)的SNP位點,這些工作為利用分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)培育優(yōu)質(zhì)的文蛤新品系提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:(1)MmBMP2基因cDNA全長為2641bp,開放閱讀框為1395bp,編碼464個氨基酸,具有信號肽,沒有跨膜區(qū)。MmBMP2蛋白含有一個結(jié)構(gòu)域,為TGF-β超家族結(jié)構(gòu)域(363Cys-464Arg)。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示,文蛤BMP2基因與櫛孔扇貝的同源性最高,為53.1%,與其它生物的同源性在43%～53%之間。在不同組織的表達(dá)結(jié)果顯示,MmBMP2基因在成體外套膜、水管、內(nèi)臟團(tuán)、鰓、閉殼肌和斧足6個組織中都有不同程度的表達(dá),其中外套膜的表達(dá)最高(P0.01),極顯著高于其他組織;在不同發(fā)育時期的表達(dá)結(jié)果顯示,MmBMP2基因在七個發(fā)育階段中也有不同程度的表達(dá),在稚貝時期表達(dá)量最高(P0.05),顯著高于其他6個時期。兩個文蛤群體中,在MmBMP2基因外顯子區(qū)域發(fā)現(xiàn)了兩個共同的生長相關(guān)SNP位點(A726G和A732T),說明該基因可能與文蛤的生長存在一定相關(guān)性,可作為分子標(biāo)記輔助育種的候選基因。(2)MmBMP7基因cDNA全長為3161bp,開放閱讀框為1257bp,編碼418個氨基酸,存在一個潛在的跨膜區(qū),含有一個結(jié)構(gòu)域,為TGF-β超家族結(jié)構(gòu)域(281Arg-418His)。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示,文蛤BMP7基因與合浦珠母貝的同源性最高,為58.7%,與其它生物的同源性在44.4%～57.6%之間。在不同組織的表達(dá)結(jié)果顯示,MmBMP7基因在六個組織(外套膜、水管、內(nèi)臟團(tuán)、鰓、閉殼肌、和斧足)中都有不同程度的表達(dá),其中外套膜的表達(dá)最高(P0.05),顯著高于其他組織;不同發(fā)育時期的表達(dá)結(jié)果顯示,MmBMP7基因在未受精卵、囊胚、原腸胚、擔(dān)輪幼蟲和稚貝期都高度表達(dá)(P0.05),猜測其可能參與幼蟲形態(tài)發(fā)生和貝殼的形成。在MmBMP7基因外顯子區(qū)域篩選SNP位點,發(fā)現(xiàn)JS群體中有2個SNP位點(C32T和G144A)與生長性狀呈顯著相關(guān),但在WL2群體中,沒有發(fā)現(xiàn)與生長性狀相關(guān)的SNP位點。(3)TGF-βR1基因cDNA全長為2357bp,其中開放閱讀框為1542bp,編碼513個氨基酸。Smart預(yù)測該蛋白功能域的結(jié)果顯示,TGF-β R1蛋白含有兩個結(jié)構(gòu)域,一個為Ⅰ型受體典型的GS結(jié)構(gòu)域(177Ser-205I1e),另一個為S-TKc結(jié)構(gòu)域(205I1e-493Leu)。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示,文蛤TGF-βR1基因與櫛孔扇貝的同源性最高,為63.08%,與其它生物的同源性在50.93%～62.65%之間。TGF-βRI基因外顯子區(qū)域篩選SNP位點,發(fā)現(xiàn)JS群體中有1個SNP位點(A427T)與生長性狀呈顯著相關(guān),但在WL2群體中,沒有發(fā)現(xiàn)與生長性狀相關(guān)的SNP位點。
【圖文】：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文TGF-β超家族受體基因并研究它們在早期斑馬魚胚胎發(fā)育中的作用，結(jié)果顯示這基因的過量表達(dá)都會嚴(yán)重影響斑馬魚背腹軸的發(fā)育，并且不同的基因會造成不程度的干擾，，猜測 TGF-β超家族受體基因在軟體動物早期胚胎發(fā)育中可能發(fā)揮重要作用[84-86]。在櫛孔扇貝中也同樣克隆了轉(zhuǎn)化生長因子-β I 型受體基因，發(fā)3' UTR 區(qū)有一個與生長相關(guān)的 SNP 位點[44]。

13圖 2-1 MmBMP2 基因 cDNA 全長序列和氨基酸序列預(yù)測-1 The full length of cDNA and deduced amino acid sequence of M起始密碼子、終止密碼子和加尾信號，*代表蛋白翻譯結(jié)束，下結(jié)構(gòu)域，陰影部分代表信號肽rames represented the start codon, the stop codon and the polyadenypresents the end of the protein translation. The underlined part is TThe bold shaded part is the signal peptide of protein.
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S917.4

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8 李U

本文編號：2639633