【摘要】：日本鰻鱺是一種廣泛分布的降海洄游性魚類,營養(yǎng)價值豐富,由于長期捕撈,生存環(huán)境的惡化,其數(shù)量正逐年下降。目前,日本鰻鱺的人工繁殖、育種仍有許多重難點未被突破。在近幾年的繁殖工作中,發(fā)現(xiàn)催熟催產(chǎn)的雌鰻肝臟異常腫大,肝臟是卵黃蛋白原的主要合成器官,卵黃蛋白原在卵細(xì)胞中轉(zhuǎn)變?yōu)槁腰S蛋白,是初孵仔鰻未的內(nèi)源性營養(yǎng),因此,雌鰻肝臟組織的變化對初孵仔鰻的存活至關(guān)重要,通過光學(xué)切片和透射電鏡切片觀察不同產(chǎn)卵情況下雌鰻肝細(xì)胞的變化,檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、和肝臟中超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及雌鰻體內(nèi)卵黃蛋白原的含量,以此來驗證在外源激素誘導(dǎo)性腺發(fā)育過程中,雌鰻肝臟是否出現(xiàn)損傷,卵黃蛋白原的分泌量是否導(dǎo)致了不同產(chǎn)卵狀況的發(fā)生。初孵仔鰻的開口餌料也一直是鰻鱺育苗的重難點,通過對鰻鱺卵的營養(yǎng)成分的檢測分析,確定了仔稚鰻飼料中各營養(yǎng)物的理論需求量,為仔稚鰻的開口餌料的研究提供了基礎(chǔ)。隨著近幾年來轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的完善,通過初孵仔鰻的轉(zhuǎn)錄組測序,分析部分與營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的基因,為今后初孵仔鰻的營養(yǎng)物質(zhì)探索提供依據(jù)。1.切片實驗觀察發(fā)現(xiàn),對照組與實驗組的主要區(qū)別如下:第一,肝細(xì)胞變形,細(xì)胞質(zhì)減少;第二,大量的空泡結(jié)構(gòu)在細(xì)胞中出現(xiàn),這些空泡結(jié)構(gòu)就是脂滴;第三,參與催熟的雌魚肝細(xì)胞中,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的數(shù)量多,且發(fā)達(dá);第四,糖原顆粒減少。接受性腺催熟的雌鰻,肝臟中出現(xiàn)許多脂滴,這是卵黃蛋白原大量合成的證據(jù),并且產(chǎn)卵狀況越好的雌魚脂滴體積越大。難產(chǎn)組、人工授精組脂滴體積小于自然對照組,因此推測這兩組合成的卵黃蛋白原可能要少于自然產(chǎn)卵組。雖然在性腺發(fā)育過程中,肝細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生巨大變化,但并不能說明這些變化是不可逆的,通過退化組與自然產(chǎn)卵組、人工授精組的對比,發(fā)現(xiàn)退化組的肝細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞質(zhì)的豐富度正逐漸向?qū)φ战M靠攏。這就說明,當(dāng)停止外源激素的誘導(dǎo)時,肝細(xì)胞是可以恢復(fù)的。通過對肝功能酶的檢測發(fā)現(xiàn):谷草轉(zhuǎn)氨酶在對照組、難產(chǎn)組、自然產(chǎn)卵組、人工授精組、退化組的活性分別為(78.20±2.01)、(87.73±3.78)、(86.33±6.35)、(83.21±1.48)、(81.80±1.78)U/L。其中,自然產(chǎn)卵組、難產(chǎn)組與對照組相比,谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均顯著提高(P0.05)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶在對照組、人工授精組、退化組、自然產(chǎn)卵組、難產(chǎn)組中的活性分別為(12.80±0.56)、(19.57±1.84)、(19.10±2.51)、(18.6±1.37)、(18.53±2.10)U/L。與對照組相比,其它組的活性均顯著提高。超氧化物歧化酶在對照組、難產(chǎn)組、自然產(chǎn)卵組、退化組、人工授精組的活性分別為(63.35±2.50)、(95.29±6.14)、(81.13±8.49)、(79.97±3.31)、(78.45±9.87)U/mL。與對照組相比,其余各組的活性均顯著提高;自然產(chǎn)卵組、退化組、人工授精組的酶活性均顯著低于難產(chǎn)組。說明:在外源激素作用下,雌鰻的肝臟出現(xiàn)損傷,難產(chǎn)組的損傷程度更深。對照組、自然產(chǎn)卵組、人工授精組、難產(chǎn)組、退化組,血清中的卵黃蛋白原含量分別為(2.49±0.19)、(4.18±0.19)、(4.26±0.15)、(3.48±0.50)、(2.63±0.21)μg/mL。除退化組之外,其余各組含量均顯著高于對照組;自然產(chǎn)卵組、人工授精組的含量要顯著高于難產(chǎn)組。肝臟中,各組含量分別為(6.58±0.29)、(7.20±0.55)、(7.05±0.72)、(6.62±0.59)、(6.63±0.14)μg/mL。各組間均不存在顯著差異。性腺中,各組含量分別為(387.73±3.84)、(454.57±17.08)、(418.94±6.50)、(419.16±16.20)、(418.24±17.87)μg/mL。與對照組相比,其余各組的含量均顯著提高。退化組、難產(chǎn)組的含量顯著低于人工授精組、自然產(chǎn)卵組。就此說明,在雌鰻性腺發(fā)育后期,肝臟中合成卵黃蛋白原的能力已經(jīng)下降;卵黃蛋白原的分泌量直接影響雌鰻的產(chǎn)卵。2.對人工繁殖下獲得的鰻鱺卵進(jìn)行營養(yǎng)成分分析得知,初孵仔鰻對飼料中蛋白質(zhì)和脂肪的需求量分別59.59%和40.86%。干物質(zhì)基礎(chǔ)下總氨基酸(TAA)的含量為8.07%,必需氨基酸(EAA)的含量為3.19%,非必須氨基酸(NEAA)的含量為4.88%。與其它魚卵進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)氨基酸含量較低,所以應(yīng)將本實驗中獲得的氨基酸含量作為飼料配比中的最低值,應(yīng)在初孵仔鰻的飼料中添加氨基酸的含量,特別是作為第一限制氨基酸的纈氨酸。鮮重基礎(chǔ)下鰻鱺卵中DHA的含量為25.98%,EPA含量為4.27%,EPA+DHA的含量為30.25%。在初孵仔鰻飼料配比中,可根據(jù)生長狀況適當(dāng)增加餌料中DHA的含量,促進(jìn)其生長,而對于EPA的含量,可將實驗中的值作為理論參考。總之,本次研究中所獲得的各營養(yǎng)素需求量,僅為初孵仔鰻的開口餌料設(shè)計提供理論參考,而各營養(yǎng)素的實際需求量還需要根據(jù)具體狀況來確定。3.通過對5個時期的初孵仔鰻轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測定,建立相關(guān)的轉(zhuǎn)錄組文庫,分析初孵仔鰻基因表達(dá)變化。本次測序共獲得基因102941條、結(jié)合NR、COG、GO、和KEGG等多個數(shù)據(jù)庫注釋的對比分析得知初孵仔鰻具有完善的代謝機制和較強的代謝活力,以及蛋白翻譯過程中較高的基因表達(dá)。對5個發(fā)育階段的差異unigenes比較分析,發(fā)現(xiàn):在文庫A與B的對比中發(fā)現(xiàn)有33487個差異基因;在B與C的比較中,有3773個差異基因;C與D對比,有1506個差異基因;D與E對比,有84個差異基因。說明各時期下的初孵仔鰻轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)發(fā)生變化。在KEGG富集的通路上,選取蛋白質(zhì)消化吸收、脂質(zhì)消化吸收、礦物質(zhì)消化吸收、碳水化合物消化吸收和維他命消化吸收的通路對差異基因進(jìn)行分析,得知初孵仔鰻對蛋白質(zhì)和糖類的消化吸收水平逐漸提高,對脂肪的消化吸收水平在前3天內(nèi)較高,之后逐漸下降趨于穩(wěn)定。
【圖文】：

15圖 1 雌鰻肝臟組織光鏡觀察照片F(xiàn)ig.1 Morphology of female eel’s liverA：對照組；B：自然產(chǎn)卵組；C： 工授精組；D：難產(chǎn)組；E：退化組A: control group; B: natural spawning; C: artificial spawning; D: difficult spawning; E:degeneration group

19圖 2 雌鰻肝臟組織透射電鏡照片F(xiàn)ig.2 Ultrastructure of female eel’s liverA-1、A-2：對照組；B-1、B-2：自然產(chǎn)卵組；C-1、C-2： 工授精組；D-1、D-2：難產(chǎn)組；E-1、E-2：退化組；N：細(xì)胞核；Nu：核 ；RER：粗面內(nèi) 網(wǎng)；M：粒體；Gl：糖原顆粒；L：脂滴；Ly：溶酶體A-1、A-2: control group; B-1、B-2: nature spawning; C-1、C-2: artificial spawning; D-1、D-2: difficult spawning; E-1、E-2: degeneration group; N: nucleus; Nu: nucleolus; RER:rough endoplasmic reticulum; M: mitochondria; Gl: glycogenosome; L: lipid droplet;Ly: lysosome
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 羅明坤;趙金良;Thammaratsuntorn Jeerawat;李傳陽;魏繼海;趙永華;;尼羅羅非魚卵巢發(fā)育過程中性類固醇激素與卵黃蛋白原含量變化及Vtg mRNA表達(dá)特征[J];中國水產(chǎn)科學(xué);2015年06期

2 袁敏;王e，

本文編號：2633024