【摘要】：性腺發(fā)育是發(fā)育生物學(xué)當(dāng)今研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一。有關(guān)性別決定與性腺發(fā)育相關(guān)基因的研究,在哺乳類(lèi)與魚(yú)類(lèi)已有了較為深入的認(rèn)識(shí),而對(duì)兩棲類(lèi)的相關(guān)研究卻非常有限。本文以我國(guó)特有的有尾兩棲動(dòng)物——大鯢(Andrias davidianus)為研究對(duì)象,在大鯢性腺高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)篩選出的差異表達(dá)基因的基礎(chǔ)上,選取了 Dmrt1、Fgf9、Fsh-R、Wnt4及Foxl2等5種性別相關(guān)基因,采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了 5個(gè)目的基因分別在24月齡大鯢精巢或卵巢中的表達(dá)特點(diǎn),進(jìn)一步采用了原位雜交技術(shù)分別對(duì)Dmrt1和Fgf9基因在18月齡、24月齡大鯢精巢和卵巢的表達(dá)情況進(jìn)行了定位。旨在初步探討該5種性別相關(guān)基因在大鯢性腺發(fā)育過(guò)程中的作用,為構(gòu)建大鯢性別決定與分化的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、探討大鯢的性腺發(fā)育等研究工作積累基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),也為大鯢的種族延續(xù)及大鯢產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展提供理論依據(jù)。主要結(jié)果與結(jié)論如下:1.首次擴(kuò)增出了大鯢Dmrt1、FgfP、Fsh-R、Wnt4及Foxl2等5種性別相關(guān)基因的部分cDN A序列。2.RT-PCR結(jié)果顯示,Dmrt1雖然在24月齡大鯢的精巢和卵巢中均有表達(dá),但精巢的表達(dá)明顯高于卵巢。原位雜交結(jié)果顯示,18月齡大鯢的Dmrt1mRNA強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)主要在精巢基部分化程度較低的精原細(xì)胞和體細(xì)胞,陽(yáng)性表達(dá)主要在精巢中部結(jié)締組織的體細(xì)胞部位以及生精小葉內(nèi)的精原細(xì)胞;24月齡大鯢的Dmrt1 mRNA的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)主要在非成熟區(qū)的精原細(xì)胞以及體細(xì)胞,陽(yáng)性表達(dá)主要在精原細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞,在精子上未見(jiàn)有陽(yáng)性表達(dá)。18月齡大鯢的Dmrt1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)主要在卵泡細(xì)胞,24月齡大鯢的Dmrt1mRNA弱陽(yáng)性表達(dá)也主要在卵泡細(xì)胞、并在卵母細(xì)胞核周?chē)形⑷醣磉_(dá),即18、24月齡大鯢精巢Dmrt1 mRNA的陽(yáng)性表達(dá)均強(qiáng)于卵巢�；谝陨辖Y(jié)果,本文認(rèn)為Dmrt1基因?qū)Υ篥F精巢發(fā)育及精子發(fā)生具有重要調(diào)控作用,特別是對(duì)精原細(xì)胞增殖和精巢功能維持起著重要作用,同時(shí)可能也在卵子發(fā)生中起到一定的作用。3.RT-PCR結(jié)果顯示,Fgf9雖然在24月齡大鯢的卵巢和精巢中均有表達(dá),但在卵巢的表達(dá)明顯強(qiáng)于精巢。原位雜交結(jié)果顯示,18月齡大鯢的Fgf9 mRNA的陽(yáng)性表達(dá)主要在卵泡細(xì)胞,24月齡的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)也主要在卵泡細(xì)胞、在卵母細(xì)胞核周?chē)腥蹶?yáng)性表達(dá);18月齡大鯢的Fgf9mRNA強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)主要在精巢上部結(jié)締組織的體細(xì)胞部位、陽(yáng)性表達(dá)出現(xiàn)在生精小葉內(nèi)的精原細(xì)胞,24月齡的陽(yáng)性表達(dá)主要在精原細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞,在精子上未見(jiàn)有陽(yáng)性表達(dá),即隨著大鯢性腺發(fā)育,Fgf9在精巢的表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì),而在卵巢的表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)�；谝陨辖Y(jié)果,本文認(rèn)為Fgf9基因是與大鯢性腺發(fā)育密切相關(guān)的基因,不但與大鯢卵巢的發(fā)育關(guān)系密切,而且可能還與精巢的發(fā)育有關(guān)。4.石蠟切片結(jié)果顯示,18月齡大鯢精巢未見(jiàn)有精子出現(xiàn),而24月齡精巢生精小葉的成熟區(qū)聚集了較多成簇排列的精子,24月齡大鯢卵巢內(nèi)的卵泡明顯大于18月齡。RT-PCR結(jié)果顯示,Fsh-R在精巢表達(dá)較強(qiáng)、卵巢表達(dá)較弱。由此本文認(rèn)為,Fsh-R基因?qū)Υ篥F的精子發(fā)生具有刺激作用,并且可能還對(duì)大鯢卵泡發(fā)育具有一定的促進(jìn)作用。5.RT-PCR結(jié)果顯示,Wnt4和Foxl2均在24月齡大鯢卵巢有較強(qiáng)表達(dá),精巢中幾乎未見(jiàn)有表達(dá)。基于此本文認(rèn)為,Wnt4和Foxl2基因可能參與調(diào)節(jié)了大鯢卵巢的發(fā)育。
【圖文】：

目的及意義逡逑（ｊｍＭｏｓ１邋ｔ／ａｖＷｔｗｗｓ）俗稱(chēng)娃娃魚(yú)，隸屬于兩棲綱、有尾目、隱鮑ｒａｎｃｈｉｄａｅ）。大鮑作為我國(guó)特有的有尾兩棲類(lèi)，，屬于國(guó)家ＩＩ級(jí)重點(diǎn)界自然保護(hù)聯(lián)盟（ＩＵＣＮ）將其受威脅程度定為極危（ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ邋ｅｎｄａｎｇ大鯢還是全球現(xiàn)存壽命最長(zhǎng)、體型最大的兩棲動(dòng)物，也是由水棲向渡的重要類(lèi)群，有重要的科研、生態(tài)與經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是用來(lái)研究動(dòng)樣性和性別決定分子機(jī)制等課題的良好材料１１１９１，具有“活化石”鯢具有較大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，再加之人工繁育技術(shù)的突破，使得大鯢各地蓬勃發(fā)展，但同時(shí)制約該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一些理論與技術(shù)瓶頸也嶺山區(qū)，大鯢一般于每年秋季進(jìn)入繁殖盛期，受精卵要經(jīng)過(guò)３５－４０孵化出幼鯢［１２１］。因此，在自然條件下，幼鯢前期的生長(zhǎng)發(fā)育都是的。，出２８－４９邋ｄ生，

分別計(jì)算出了研宄用１８月齡與２４月齡共１２尾大鯢全長(zhǎng)和體重逡逑的平均值，通過(guò)獨(dú)立樣本Ｔ檢驗(yàn)對(duì)不同月齡雌、雄大鯢的全長(zhǎng)和體重進(jìn)行了比較逡逑分析（圖３－１）。從圖３－１可以看出，１８月齡的雌、雄大鯢在全長(zhǎng)和體重方面有顯逡逑著差異（尸＜0．0５），２４月齡的雌、雄大鯢在全長(zhǎng)和體重方面有極顯著差異（尸＜０．０１），逡逑且相同月齡雄鯢的全長(zhǎng)和體重均明顯大于雌鯢。逡逑５０邐逡逑N希

本文編號(hào)：2606840