發(fā)布時間：2020-03-29 19:30

【摘要】：海參養(yǎng)殖是海洋經濟中的一大產業(yè),海參養(yǎng)殖環(huán)境中耐藥菌的分布是人們比較關心的問題�？股剡M入海水養(yǎng)殖環(huán)境篩選出耐藥細菌,增加環(huán)境中耐藥基因的水平轉移和重組,造成耐藥基因在環(huán)境、動物和人體細菌抗性染色體中的流通,從而導致耐藥基因轉移至人體致病菌的抗性染色體中,危害人類健康。因此耐藥菌的分布分析有著非常重要的意義。本實驗以在榮成兩處海參養(yǎng)殖池(122°14′34″E 36°54′36″N)和雙島灣(121°57′52″E 37°28′16″N)中采集的五組樣品(SS1、WS1、SS2、WS2、WS3)為實驗對象,利用稀釋涂布法估算SSl、WS1、SS2、WS2、WS3每克或者每毫升樣品中可培養(yǎng)細菌的數量,分別約為54.4x104、3.6x104、40×104、20.5×104、4.2×104,通過不同的抗生素篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)發(fā)現,所有樣品中,四環(huán)素和克林霉素耐性菌的比例都相對較高。藥敏紙片擴散法測定分離菌株的表型耐藥性,計算MAR指數,比較分析五組樣品間耐藥菌分布的異同。我們發(fā)現沉積物樣品中耐藥菌的分布顯著大于水樣品中耐藥菌的分布；分離菌株對氨基糖苷類、四環(huán)素類、林可酰胺類抗生素的耐藥頻率顯著高于分離菌株對β-內酰胺類、利福平、氯霉素類、大環(huán)內酯類、喹諾酮類抗生素的耐藥頻率；耐藥菌在海參養(yǎng)殖環(huán)境和遠離人類活動的非養(yǎng)殖環(huán)境中都有分布；在分離到的多重耐藥菌中,變形菌門細菌占43.28%,厚壁菌門細菌占28.36%,擬桿菌門細菌占25.37%,放線菌門細菌占2.99%�；�16S rDNA序列,分析了105株分離菌株的分類地位并將其保藏入-80°C超低溫冰箱,其中變型菌門細菌53株,厚壁菌門細菌26株,擬桿菌門細菌24株,放線菌門細菌2株,其中相似度小于98%的潛在新細菌32株。除了分析海參養(yǎng)殖環(huán)境耐藥菌的分布之外,本實驗還從不同的樣品中分離到五株海洋新細菌,利用多相分類的手段鑒定其分類地位。從北極某海域(8°21′629″E 72°8′827″N)沉積物中分離到一株海洋新細菌,編號為435。過氧化氫酶和氧化酶都是陽性,菌落呈現似大米透明色,兼性厭氧,革蘭氏陰性。菌株435T的細胞形態(tài)為短桿或彎曲桿狀,耐受溫度范圍是4-25℃、pH 6.0-9.0、耐受鹽度范圍是0.5-6.0%(w/v)NaCl.呼吸醌為Q-8,主要極性脂是磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油,主要脂肪酸是15:1ω8c sum in feature 3 (comprising C16.1ω7c/15 iso2-OH)、 C17:1ω8c、 C15:0。 16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,菌株435T與科爾韋爾氏菌屬相似度在92.1%-95.6%之間,基因組DNAG+C含量是38.7 mo1%。綜合不同的表型特征以及系統(tǒng)發(fā)育學和遺傳學分析,建議菌株435T (= CICC 10860T= ATCC BAA-2609T)代表科爾韋爾氏菌屬的一個新物種,命名為北極科爾韋爾氏菌(Colwellia arctica sp. nov.) 。菌株SY21T是分離自威海近海海岸帶(122°0′37″E 37°31′33″N)沉積物的一株海洋新細菌。最適生長溫度在33-37°C之間,最適生長pH為pH 7.0-7.5,最適鹽度2-3%(w/v)NaCl.呼吸醌類型是MK-7,主要脂肪酸包括iso-C15:0、iso-C17:03-OH和anteiso-C15:0'主要極性脂是磷脂酰乙醇胺、氨脂質和一個未知成分的脂質,基因組DNA G+C含量是37.9 mo1%。根據16S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,菌株SY21T與厭氧海洋吞噬菌JCM 18693T的相似度最高(94.7%)。依據與其他菌株系統(tǒng)發(fā)育關系和不同的表型特征,菌株SY21T可以和其他菌株區(qū)分開。實驗數據可以說明菌株SY21T是海洋吞噬菌屬的一個新物種,建議命名為沉積物海洋吞噬菌(Mariniphaga sediminis sp. nov.),模式菌株是SY21T (=KCTC 42260T= MCCC 1H00107T) 。菌株FB218T是通過富集分離的方法得到的來自于山東威海榮成某海參養(yǎng)殖池的底泥(122°14′25.9″E 36°57′26.2″N)的細菌。菌落呈黃色,革蘭氏陰性、兼性厭氧。16S rRNA基因序列系統(tǒng)發(fā)育分析顯示菌株FB218T應該歸屬于海洋滑動菌科,和嗜中溫羧酸利用桿菌JCM 18290T和大安縣羧酸利用桿菌JCM 19490T親緣關系最相近。菌株FB218T的主要脂肪酸包括iso-C15:0、 iso-C17:03-OH、 iso-C15:03-OH和anteiso-C15:0'主要極性脂是兩個未知成分的脂質和磷脂,呼吸醌是MK-7�；蚪MDNA G+C含量是40.0 mol%。實驗數據證明菌株FB218T代表了羧酸利用桿菌屬的一株新物種,建議命名為細線形羧酸利用桿菌。模式菌株是FB218T(Carboxylicivirga linearis sp. nov.),模式菌株為FB218T (=KCTC 42260T= MCCC 1H00107T).菌株MF326T來源于威海榮成某海參池沉積物(122°14′34″E 36°54′36″N),菌落為黃色,革蘭氏陰性、兼性厭氧�；�16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析,菌株MF326T與牡蠣海研站菌和藻海研站菌相似度最高,分別是94.3%和93.9%,可以說明菌株MF326T應該是海研站菌屬的一株新物種。菌株MF326T的主要脂肪酸是iSO-C15:0,、鏈長為13.565的未知脂肪酸和anteiso-C15.0主要極性脂是兩個未知成分的脂質和磷脂酰乙醇胺。呼吸醌類型是MK-6,基因組DNA G+C含量是40.7mol%。綜合分析,菌株MF326T是海研站菌屬的一株新細菌,建議命名沉積物海研站菌(Mesonia sediminis sp. nov.),模式菌株MF326T (=KCTC 42255T= MCCC1H00125T)菌株HQYD1T分離于柄海鞘,是一株革蘭氏陰性、兼性厭氧、菌落呈橙色的海洋細菌。菌株HQYD1T的細胞桿狀且能通過滑動的方式運動。最適生長溫度是28℃,最適生長鹽度是2-3%NaCL菌株HQYD1T的16SrRNA基因序列與菌株Y11T的相似度最高(94.83%),其次是與發(fā)酵糖絲菌DSM 9555T(92.28%)菌株HQYD1T檢測到的主要脂肪酸是C16：0、C18：0和iso-C15:0'主要極性脂是兩個未知成分的脂質和磷脂,主要呼吸醌類型是MK-7。綜合實驗數據,建議建立滑動桿菌屬為海洋滑動菌科的一個新屬,建議菌株HQYD1T為滑動桿菌屬的一個新物種,新屬命名為滑動桿菌屬(Labilibacter gen. nov.),新種命名為橙色滑動桿菌(Labilibacter aurantiaca gen. nov. sp. nov.),模式菌株HQYD1T (=MCCC 1K02304T= KCTC42583T).另外,建議將原海洋糖絲菌Y11T修訂,劃分到滑動桿菌屬,命名為海洋滑動桿菌(Labilibacter marina comb. nov.),模式菌株是Y11T (=CICC10837T= KCTC42400T)本實驗分析了海參養(yǎng)殖環(huán)境中耐藥細菌的分布,可以為有關部門的監(jiān)管和治理提供理論基礎；鑒定了五株海洋新細菌,豐富了海洋微生物資源庫,同時也為一些潛在新基因的研究儲備了資源。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.1

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