【摘要】：本研究從微生態(tài)角度出發(fā),對(duì)池塘養(yǎng)殖牙鲆(Paralichthys olivaceus)腸道菌群結(jié)構(gòu)及其影響因素進(jìn)行了初步分析,同時(shí)向養(yǎng)殖池塘環(huán)境中添加微生態(tài)制劑,探索了微生態(tài)制劑對(duì)池塘環(huán)境的改變及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的應(yīng)答變化,以期為今后牙鲆池塘養(yǎng)殖專用微生態(tài)制劑的研制和養(yǎng)殖環(huán)境微生態(tài)調(diào)控技術(shù)構(gòu)建提供理論依據(jù),同時(shí)有利于建立池塘養(yǎng)殖牙鲆健康生長(zhǎng)調(diào)控技術(shù)。本研究主要包括三個(gè)部分：工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析、益生菌的分離培養(yǎng)及其水質(zhì)調(diào)控效果評(píng)價(jià)、池塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對(duì)益生菌調(diào)控的響應(yīng)。主要研究結(jié)果如下：1、工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析為比較池塘和工廠化養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)差異及其與餌料、水環(huán)境、底質(zhì)等的關(guān)系,采用MiSeq高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)分析手段,構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等7個(gè)樣品的16s rRNA基因測(cè)序文庫(kù),分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性。結(jié)果表明：池塘養(yǎng)殖牙鲆腸道(B1)中以厚壁菌門(30.49%)、變形菌門(19.16%)和梭桿菌門(11.11%)為主,其中芽孢桿菌屬(27.66%)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),弧菌屬(0.16%)豐度最��；工廠化養(yǎng)殖牙鲆腸道(B5)中以變形菌門(44.31%)、厚壁菌門(11.57%)和放線菌門(4.79%)為主,其中不動(dòng)桿菌屬(10.37%)豐度最大,弧菌屬(4.05%)相對(duì)B1中豐度較高。牙鲆腸道優(yōu)勢(shì)菌群主要與營(yíng)養(yǎng)代謝調(diào)節(jié)相關(guān),同時(shí)有益微生物和有害微生物也是腸道菌群的重要組成部分。差異性和系統(tǒng)進(jìn)化分析表明兩種養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)與餌料中菌群關(guān)系密切,此外受養(yǎng)殖水環(huán)境中菌群影響較大。池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)受底質(zhì)影響相對(duì)較小。2、兩株益生菌的分離培養(yǎng)及水質(zhì)調(diào)控效果評(píng)價(jià)篩選了一種微生態(tài)制劑,具有較好的養(yǎng)殖水質(zhì)調(diào)控效果。為進(jìn)一步鑒定其有效成分,綜合利用基于細(xì)菌16S rRNA基因文庫(kù)的Miseq高通量測(cè)序技術(shù)、生物信息學(xué)分析方法、細(xì)菌純化培養(yǎng)技術(shù)等手段,認(rèn)識(shí)了該種微生態(tài)制劑的菌群組成,對(duì)可培養(yǎng)的兩株優(yōu)勢(shì)菌種進(jìn)行分離純化,探明了其生理生化特性,鑒定了其分類地位,摸清了適宜的培養(yǎng)條件,驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)室條件下的水質(zhì)處理效果,為下一步益生菌的分離純化和生產(chǎn)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：該微生態(tài)制劑中主要的菌群包括腸桿菌屬(31.99%)、芽孢乳桿菌屬(31.81%)、乳桿菌屬(15.8%)、芽孢桿菌屬(1.44%)等,另有18.96%的細(xì)菌尚未分類。經(jīng)分離純化,培養(yǎng)基篩選、形態(tài)學(xué)鑒別、生理生化反應(yīng)、分子生物學(xué)鑒定,得到植物乳桿菌A、芽孢桿菌B兩株有益菌。在實(shí)驗(yàn)室條件下摸索兩株菌的最適生長(zhǎng)條件,結(jié)果顯示：植物乳桿菌A、芽孢桿菌B的最適生長(zhǎng)pH分別為6.5、6.0,最適生長(zhǎng)溫度分別為30℃、36℃。為了在實(shí)驗(yàn)室條件下評(píng)價(jià)其水質(zhì)調(diào)控能力,采用水楊酸鹽法、重氮化作用法、PhodVer3抗壞血酸法分別驗(yàn)證其對(duì)氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解能力。結(jié)果表明：植物乳桿菌A(OD600nm=2.33)、芽孢桿菌B (OD600nm=2.23)培養(yǎng)達(dá)到最大密度時(shí),按照10：1混合使用凈化水質(zhì)效果最好,對(duì)水體中氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解率分別達(dá)到了73.1%、57.8%、52.4%。3、池塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對(duì)益生菌調(diào)控的響應(yīng)為評(píng)價(jià)一種微生態(tài)制劑對(duì)池塘養(yǎng)殖水環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的調(diào)控效果,采用MiSeq高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)分析手段,構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等4批次22個(gè)樣品的16s rRNA基因測(cè)序文庫(kù),分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性在微生態(tài)制劑調(diào)控過(guò)程中的變化趨勢(shì)。結(jié)果表明,試驗(yàn)期間,微生態(tài)制劑對(duì)養(yǎng)殖水體中氨氮降解率最高達(dá)到88.9%；亞硝酸鹽含量降解率最高達(dá)到67.9%,磷酸鹽降解率最高達(dá)到69%。另一方面,池塘水體中葉綠素含量增加了19.05%,擬桿菌門菌群呈增加趨勢(shì),變形菌門呈下降趨勢(shì)；底泥中芽孢桿菌屬變化最為明顯,由最初的3.78%增加到33.64%。牙鲆腸道中腸桿菌屬、軍團(tuán)桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬均有不同程度的增加,弧菌屬相對(duì)豐度由最初的0.16%降低到0.05%。另外,還在牙鲆腸道內(nèi)檢測(cè)到植物乳桿菌成分。差異性和系統(tǒng)進(jìn)化分析表明：微生態(tài)制劑能有效改善水環(huán)境,影響池塘養(yǎng)殖水體、底泥和牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化。牙鲆腸道優(yōu)勢(shì)菌群主要與營(yíng)養(yǎng)代謝調(diào)節(jié)相關(guān),通過(guò)微生態(tài)制劑調(diào)控其菌群結(jié)構(gòu),能夠維護(hù)牙鲆的健康,促講生長(zhǎng)。
【圖文】：

海海洋大學(xué)碩士學(xué) 論文 的測(cè)序序 對(duì) 的OTU種類得到的稀釋性曲線 2-1 ，說(shuō)度 信，測(cè)序 果能夠真 的 映 品中 勢(shì) 菌的數(shù) 關(guān)系 通 計(jì)算各 品中 菌多 性指數(shù) 表2-1 ， 中C7 品的香 指數(shù)辛 森指數(shù)最小 0.020，表明 塘 泥中的 菌多 性最高 E3 最小 1.70，，辛 森指數(shù)最大 0.336，表明 性 粒飼料中的 菌綜 析 種 殖模式 各 品的 菌多 性，發(fā) B1 品的 菌5，表明 塘 殖牙 腸道菌群多 性高于 廠 殖牙 ，而 時(shí) 性高于E3，C7中菌群多 性最高，表明 塘 殖條 牙 腸道 餌料和 質(zhì) 密 的關(guān)系，但 果顯示A1 品的 菌多 性 于 殖車間水系 中長(zhǎng)期累 了多種微生物的 在 關(guān) 群多 性 到多個(gè) 境因子的 調(diào)

海海洋大學(xué)碩士學(xué) 論文18圖2-2 屬水平 樣品中細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)及分布A1，池塘水樣 B1，池塘牙鲆腸道樣品 C7，池塘 泥樣品 E1，池塘餌料樣品A8，工廠化水樣 B5，工廠化牙鲆腸道樣品 E3，工廠化餌料樣品Fig.2-2 Bacterial communities and distribution of the samples at the genus levelA1, pond water; B1, pond-culture Japanese flounder intestine; C7, pond sediment; E1, frozen baitfish; A8, indoor culture water; B5, tank-culture Japanese flounder intestine; E3, commercial diet2.2.3 于 OUT 數(shù)量的牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)在門和屬的 類水 別對(duì)牙 腸道菌群組 行鑒定的 果表明
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S965.399

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 溫燦權(quán);戴佳佳;黃梅丹;劉慶新;張立彬;;一株植物乳桿菌的分離鑒定及其生長(zhǎng)特性研究[J];福建畜牧獸醫(yī);2014年03期

2 李健,孫修濤,王群,戴芳鈺,劉得月,馬向東;微生態(tài)制劑在甲殼動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究[J];海洋水產(chǎn)研究;2001年02期

3 覃映雪;王曉林;鄢慶枇;王峗;葉冬鳳;;青石斑魚(yú)腸道菌群研究[J];海洋水產(chǎn)研究;2007年05期

4 王翔凌;楊先樂(lè);;微生態(tài)制劑與水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖(上)[J];科學(xué)養(yǎng)魚(yú);2007年02期

5 付天璽;魏開(kāi)建;許國(guó)煥;;芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究和應(yīng)用概況[J];水利漁業(yè);2007年03期

6 華雪銘,周洪琪,邱小琮,劉小剛,曹丹,張登瀝;飼料中添加芽孢桿菌和硒酵母對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)及抗病力的影響[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2001年05期

7 鄭虹;施巧琴;施碧紅;黃建忠;;芽孢桿菌對(duì)養(yǎng)殖水體凈化作用的比較研究[J];微生物學(xué)雜志;2005年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李曉然;基于核糖體RNA高通量測(cè)序分析微生物群落結(jié)構(gòu)[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 王福強(qiáng);牙鲆腸道益生菌的分離鑒定及其應(yīng)用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2606468