【摘要】：本研究從微生態(tài)角度出發(fā),對池塘養(yǎng)殖牙鲆(Paralichthys olivaceus)腸道菌群結(jié)構(gòu)及其影響因素進行了初步分析,同時向養(yǎng)殖池塘環(huán)境中添加微生態(tài)制劑,探索了微生態(tài)制劑對池塘環(huán)境的改變及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的應(yīng)答變化,以期為今后牙鲆池塘養(yǎng)殖專用微生態(tài)制劑的研制和養(yǎng)殖環(huán)境微生態(tài)調(diào)控技術(shù)構(gòu)建提供理論依據(jù),同時有利于建立池塘養(yǎng)殖牙鲆健康生長調(diào)控技術(shù)。本研究主要包括三個部分：工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析、益生菌的分離培養(yǎng)及其水質(zhì)調(diào)控效果評價、池塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對益生菌調(diào)控的響應(yīng)。主要研究結(jié)果如下：1、工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析為比較池塘和工廠化養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)差異及其與餌料、水環(huán)境、底質(zhì)等的關(guān)系,采用MiSeq高通量測序技術(shù)和生物信息學分析手段,構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等7個樣品的16s rRNA基因測序文庫,分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性。結(jié)果表明：池塘養(yǎng)殖牙鲆腸道(B1)中以厚壁菌門(30.49%)、變形菌門(19.16%)和梭桿菌門(11.11%)為主,其中芽孢桿菌屬(27.66%)占絕對優(yōu)勢,弧菌屬(0.16%)豐度最�。还S化養(yǎng)殖牙鲆腸道(B5)中以變形菌門(44.31%)、厚壁菌門(11.57%)和放線菌門(4.79%)為主,其中不動桿菌屬(10.37%)豐度最大,弧菌屬(4.05%)相對B1中豐度較高。牙鲆腸道優(yōu)勢菌群主要與營養(yǎng)代謝調(diào)節(jié)相關(guān),同時有益微生物和有害微生物也是腸道菌群的重要組成部分。差異性和系統(tǒng)進化分析表明兩種養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)與餌料中菌群關(guān)系密切,此外受養(yǎng)殖水環(huán)境中菌群影響較大。池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)受底質(zhì)影響相對較小。2、兩株益生菌的分離培養(yǎng)及水質(zhì)調(diào)控效果評價篩選了一種微生態(tài)制劑,具有較好的養(yǎng)殖水質(zhì)調(diào)控效果。為進一步鑒定其有效成分,綜合利用基于細菌16S rRNA基因文庫的Miseq高通量測序技術(shù)、生物信息學分析方法、細菌純化培養(yǎng)技術(shù)等手段,認識了該種微生態(tài)制劑的菌群組成,對可培養(yǎng)的兩株優(yōu)勢菌種進行分離純化,探明了其生理生化特性,鑒定了其分類地位,摸清了適宜的培養(yǎng)條件,驗證了實驗室條件下的水質(zhì)處理效果,為下一步益生菌的分離純化和生產(chǎn)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。實驗結(jié)果顯示：該微生態(tài)制劑中主要的菌群包括腸桿菌屬(31.99%)、芽孢乳桿菌屬(31.81%)、乳桿菌屬(15.8%)、芽孢桿菌屬(1.44%)等,另有18.96%的細菌尚未分類。經(jīng)分離純化,培養(yǎng)基篩選、形態(tài)學鑒別、生理生化反應(yīng)、分子生物學鑒定,得到植物乳桿菌A、芽孢桿菌B兩株有益菌。在實驗室條件下摸索兩株菌的最適生長條件,結(jié)果顯示：植物乳桿菌A、芽孢桿菌B的最適生長pH分別為6.5、6.0,最適生長溫度分別為30℃、36℃。為了在實驗室條件下評價其水質(zhì)調(diào)控能力,采用水楊酸鹽法、重氮化作用法、PhodVer3抗壞血酸法分別驗證其對氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解能力。結(jié)果表明：植物乳桿菌A(OD600nm=2.33)、芽孢桿菌B (OD600nm=2.23)培養(yǎng)達到最大密度時,按照10：1混合使用凈化水質(zhì)效果最好,對水體中氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解率分別達到了73.1%、57.8%、52.4%。3、池塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對益生菌調(diào)控的響應(yīng)為評價一種微生態(tài)制劑對池塘養(yǎng)殖水環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的調(diào)控效果,采用MiSeq高通量測序技術(shù)和生物信息學分析手段,構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等4批次22個樣品的16s rRNA基因測序文庫,分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性在微生態(tài)制劑調(diào)控過程中的變化趨勢。結(jié)果表明,試驗期間,微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體中氨氮降解率最高達到88.9%；亞硝酸鹽含量降解率最高達到67.9%,磷酸鹽降解率最高達到69%。另一方面,池塘水體中葉綠素含量增加了19.05%,擬桿菌門菌群呈增加趨勢,變形菌門呈下降趨勢；底泥中芽孢桿菌屬變化最為明顯,由最初的3.78%增加到33.64%。牙鲆腸道中腸桿菌屬、軍團桿菌屬、不動桿菌屬均有不同程度的增加,弧菌屬相對豐度由最初的0.16%降低到0.05%。另外,還在牙鲆腸道內(nèi)檢測到植物乳桿菌成分。差異性和系統(tǒng)進化分析表明：微生態(tài)制劑能有效改善水環(huán)境,影響池塘養(yǎng)殖水體、底泥和牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化。牙鲆腸道優(yōu)勢菌群主要與營養(yǎng)代謝調(diào)節(jié)相關(guān),通過微生態(tài)制劑調(diào)控其菌群結(jié)構(gòu),能夠維護牙鲆的健康,促講生長。
【圖文】：

海海洋大學碩士學 論文 的測序序 對 的OTU種類得到的稀釋性曲線 2-1 ，說度 信，測序 果能夠真 的 映 品中 勢 菌的數(shù) 關(guān)系 通 計算各 品中 菌多 性指數(shù) 表2-1 ， 中C7 品的香 指數(shù)辛 森指數(shù)最小 0.020，表明 塘 泥中的 菌多 性最高 E3 最小 1.70，，辛 森指數(shù)最大 0.336，表明 性 粒飼料中的 菌綜 析 種 殖模式 各 品的 菌多 性，發(fā) B1 品的 菌5，表明 塘 殖牙 腸道菌群多 性高于 廠 殖牙 ，而 時 性高于E3，C7中菌群多 性最高，表明 塘 殖條 牙 腸道 餌料和 質(zhì) 密 的關(guān)系，但 果顯示A1 品的 菌多 性 于 殖車間水系 中長期累 了多種微生物的 在 關(guān) 群多 性 到多個 境因子的 調(diào)

海海洋大學碩士學 論文18圖2-2 屬水平 樣品中細菌種群結(jié)構(gòu)及分布A1，池塘水樣 B1，池塘牙鲆腸道樣品 C7，池塘 泥樣品 E1，池塘餌料樣品A8，工廠化水樣 B5，工廠化牙鲆腸道樣品 E3，工廠化餌料樣品Fig.2-2 Bacterial communities and distribution of the samples at the genus levelA1, pond water; B1, pond-culture Japanese flounder intestine; C7, pond sediment; E1, frozen baitfish; A8, indoor culture water; B5, tank-culture Japanese flounder intestine; E3, commercial diet2.2.3 于 OUT 數(shù)量的牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)在門和屬的 類水 別對牙 腸道菌群組 行鑒定的 果表明
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S965.399

【參考文獻】

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本文編號：2606468