發(fā)布時間：2024-11-26 21:57

　　 為了開發(fā)高靈敏度、高特異性且易于普及的玉米轉抗草丁膦抗性Bialaphos resistance(Bar)基因的鑒定方法,采用核酸序列依賴性擴增(Nucleic Acid Sequence-based Amplification,NASBA)技術,根據轉基因成分Bar基因的mRNA序列,設計合成Bar基因的檢測特異引物和探針,通過優(yōu)化NASBA擴增反應程序和產物檢測體系,開發(fā)不依賴核酸擴增儀的轉基因成分Bar的分子檢測試劑盒,短時間內對轉基因成分Bar進行高靈敏度篩查。結果表明,檢測特異性好且靈敏度高,其靈敏度可達6 fg,樣本檢測也說明試劑盒具有較高靈敏度和特異性,且適合基層部門和采樣現場對Bar轉基因成分的早期鑒定。

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【部分圖文】：

圖1 Bar-NASBA試劑盒對Bar的檢測特異性

為探索檢測體系的最低檢出限,實驗將原濃度為600ng·μL-1轉Bar基因的玉米的RNA做連續(xù)的梯度稀釋,濃度梯度范圍見表1:從1×10-1ng·μL-1至1×10-8ng·μL-1。對稀釋后的RNA樣品進行NASBA反應,NASBA反應產物的電泳結果證明,模板濃度稀釋至10....

圖2 Bar-NASBA試劑盒的檢測靈敏性

電泳結果也表明,檢測濃度可達到1×10-8ng·μL-1,濃度為1×10-9ng·μL-1時顯示為陰性(結果未給出),由此可見,該反應體系具有較高的靈敏性可達fg級別,且陰性對照無擴增信號(圖2)。3.3Bar-NASBA檢測試劑盒樣本檢測結果

圖3 Bar-NASBA試劑盒的樣本檢測

采用Bar-NASBA試劑盒分別對普通玉米與轉Bar玉米取莖葉片、玉米莖和玉米根總RNA檢測,結果:轉Bar基因玉米相關樣品均顯陽性,表明試劑盒應用于轉Bar基因的玉米各組織檢測具有較高靈敏度和特異性(圖3)。3.4Bar-NASBA檢測試劑盒的穩(wěn)定性和保存期結果

本文編號：4012645