利用萌動(dòng)的成熟胚作外植體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化,可有效提高高粱轉(zhuǎn)基因材料選育的效率。為了建立并完善以高粱萌動(dòng)種胚作為外植體的遺傳轉(zhuǎn)化體系,本研究以高粱材料Is-623為轉(zhuǎn)化受體,質(zhì)粒pM3301UbiSpCP4為外源基因供體,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并對(duì)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因素進(jìn)行分析。結(jié)果表明,麥草畏（dicamba）誘導(dǎo)高粱萌動(dòng)的成熟胚產(chǎn)生愈傷組織適宜濃度約為5 mg·L^-1;農(nóng)桿菌侵染時(shí)間為2 h時(shí)遺傳轉(zhuǎn)化效率較高;經(jīng)篩選共獲得301塊抗性愈傷組織,75個(gè)轉(zhuǎn)化事件,經(jīng)PCR、Southern blotting雜交分析、CP4-EPSPS蛋白檢測(cè)試紙條檢測(cè)及田間草甘膦耐性鑒定,最終獲得草甘膦耐性等級(jí)1級(jí)株系6株,耐性等級(jí)2級(jí)株系3株的轉(zhuǎn)基因高粱株系。本研究初步建立了以高粱萌動(dòng)種胚作為外植體的遺傳轉(zhuǎn)化體系,為高粱遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 受體材料
        1.1.2 菌株與質(zhì)粒
        1.1.3 培養(yǎng)基配方
            1)侵染培養(yǎng)基:
            2)共培養(yǎng)基:
            3)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基:
            4)篩選培養(yǎng)基:
            5)再生培養(yǎng)基:
            6)生根培養(yǎng)基:
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 外植體的準(zhǔn)備
        1.2.2 農(nóng)桿菌的活化與外植體的侵染、轉(zhuǎn)化、篩選、再生
        1.2.3 麥草畏對(duì)高粱成熟萌動(dòng)胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響
        1.2.4 侵染時(shí)間對(duì)高粱愈傷組織轉(zhuǎn)化效率的影響
        1.2.5 轉(zhuǎn)化株的PCR檢測(cè)
        1.2.6 轉(zhuǎn)化植株的Southern blotting分析
        1.2.7 轉(zhuǎn)基因高粱CP4-EPSPS基因表達(dá)產(chǎn)物的測(cè)定
        1.2.8 轉(zhuǎn)基因高粱耐草甘膦性能的鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 轉(zhuǎn)CP4-EPSPS基因高粱植株的獲得
    2.2 麥草畏對(duì)高粱成熟萌動(dòng)胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響
    2.3 農(nóng)桿菌侵染時(shí)間對(duì)高粱遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響
    2.4 轉(zhuǎn)基因植株的PCR分析
    2.5 轉(zhuǎn)基因植株Southern blotting分析
    2.6 轉(zhuǎn)基因高粱CP4-EPSPS基因表達(dá)產(chǎn)物的測(cè)定
    2.7 轉(zhuǎn)基因高粱耐草甘膦性能的鑒定
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：4005575