為了進(jìn)一步研究冬小麥的根系建成,并為今后高寒地區(qū)的冬小麥育種奠定基礎(chǔ)。以東農(nóng)冬麥2號為材料,利用PCR技術(shù)得到TaEXPB12-A/B/D 3個(gè)同源基因的CDS全長。其核酸序列長度均為846 bp,編碼281個(gè)氨基酸,同源性達(dá)到98.46%,分別定位在2AL、2BL、2DL染色體上,蛋白均具備膨脹素基因序列特有的結(jié)構(gòu)域DPBB₁,分別位于142-810 bp,142-834 bp,142-834 bp。啟動子分析結(jié)果顯示,這3段序列中均含有多個(gè)與根特異表達(dá)相關(guān)的作用元件,以及多個(gè)激素響應(yīng)元件和非生物脅迫響應(yīng)元件。qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)TaEXPB12-A/B/D基因在根中特異性表達(dá),低溫會抑制TaEXPB12-A/B/D 3個(gè)同源基因的表達(dá),而干旱、脫落酸、茉莉酸甲酯及水楊酸等處理會促進(jìn)它們的表達(dá)。洋蔥表皮亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示,3個(gè)基因均定位于細(xì)胞壁。TaEXPB12-A/B/D蛋白質(zhì)在冬小麥根的細(xì)胞壁中特異性分布,并參與冬小麥抵御外界多種非生物脅迫的過程,在3個(gè)基因響應(yīng)外界脅迫的過程中,TaEXPB12-A占據(jù)表達(dá)優(yōu)勢。結(jié)果說明,TaEXPB12-A/B/D在冬小...

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圖1TaEXPB12基因的菌落PCR擴(kuò)增結(jié)果

目的基因擴(kuò)增獲得846bp左右的目的條帶,與預(yù)期片段大小相似(圖1)。膠回收,連接T3載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,并進(jìn)行菌液PCR鑒定(圖2)。測序結(jié)果與本研究室的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果進(jìn)行對比,成功得到TaEXPB12-A/B/D基因�；蛐蛄刑峤籒CBI注冊,GenBank登錄號分別為M....

圖2TaEXPB12基因的菌液PCR鑒定結(jié)果

圖1TaEXPB12基因的菌落PCR擴(kuò)增結(jié)果2.2序列生物信息學(xué)分析

圖3TaEXPB12-A/B/D的氨基酸同源比對

TaEXPB12-A/B/D蛋白質(zhì)信號肽預(yù)測分析顯示,該蛋白質(zhì)的切割點(diǎn)位于氨基酸25-26位,TaEXPB12-A/B/D基因信號肽序列完全相同。除此之外,生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,TaEXPB12-A/B/D蛋白均具備膨脹素基因序列特有的結(jié)構(gòu)域DPBB_1,分別位于142-810....

圖4TaEXPB12-A/B/D編碼的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測

圖3TaEXPB12-A/B/D的氨基酸同源比對2.3啟動子反應(yīng)元件預(yù)測分析

本文編號：3980403