一、油菜轉錄因子Bna ERF5/6的功能驗證本研究選用耐漬型油菜品種中雙9號,以淹水處理12小時的油菜芽的c DNA為模板,克隆與耐漬相關的基因Bna ERF5、Bna ERF6,并用農(nóng)桿菌介導法遺傳轉化擬南芥。通過淹水處理,驗證擬南芥的表型。主要結果如下:克隆到2個與耐漬相關的基因Bna ERF5、Bna ERF6,并且成功構建植物過表達載體PBI121-Bna ERF5、PBI121-Bna ERF6。通過農(nóng)桿菌介導法遺傳轉化擬南芥,經(jīng)過連續(xù)三代在卡那霉素培養(yǎng)基的篩選、陽性苗DNA檢測以及純系植株q PCR檢測外源基因的表達量等一系列檢測,得到Bna ERF5、Bna ERF6這2個基因的過表達擬南芥純合株系。對轉基因和野生型擬南芥株系進行淹水處理,淹水后擬南芥的葉片均變黃,恢復后擬南芥的部分葉片呈紫色,部分老葉片干枯;在淹水7天恢復10天后,轉基因植株基本可以正常開花,而野生型植株矮小,發(fā)育遲緩,不能正常開花。對淹水0h、3h、6h、9h擬南芥中耐漬基因ADH1、PDC1的表達量檢測發(fā)現(xiàn),超表達Bna ERF5擬南芥中ADH1基因在淹水處理0h、3h的表達量均較野生型提高,在淹...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1pEASY-BluntSimple克隆載體結構圖

學位論文第一部分油菜轉錄因子ERF的功能驗證C反應5分鐘。反應結束后放在冰上。取到50μLDH5α感受態(tài)細胞中混勻。冰水浴20分鐘。1min30s以后，放在冰上2分鐘。B培養(yǎng)基。180rpm、37oC震蕩培養(yǎng)40分鐘。1分鐘，倒掉部分上清....

圖2.2PBI121表達載體結構圖

酶切切體系：質(zhì)粒30μl，酶XbaI2μl，酶SmaI2μl，Buffer10μl，水56μl，共100μl，2，37oC酶切3個小時，加入20μlLoadingBuffer，用移液槍吸打混勻后瓊脂糖凝膠收有目的條帶的片段�；厥彰盖泻蟮馁|(zhì)粒收集管里放入吸附....

圖3.1BnaERF5/6基因cDNA編碼序列的擴增結果示意圖

圖3.1BnaERF5/6基因cDNA編碼序列的擴增結果示SchematicdiagramoftheamplificationresultoftheBnaERF5/6RANS2KBPLUSMarker(全式金);1為BnaERF5基因PCR....

圖3.2導入PBI121-BnaERF5/6質(zhì)粒的農(nóng)桿菌PCR鑒定示意圖

3.2導入PBI121-BnaERF5/6質(zhì)粒的農(nóng)桿菌aticdiagramofagrobacteriumPCRwithPBI1S2KBPLUSMarker;1均為單克隆的PCR產(chǎn)物，2為r;1:ProductionofPCR,2:CK....

本文編號：3980092