大豆[Glycin max(Linn.)Merr],又名黃豆,古代稱為“菽”,是雙子葉植物豆科大豆屬的二倍體(2n=40)一年生草本植物。大豆既是重要的高蛋白糧飼兼用作物和油料作物,也是飼料和食品等工業(yè)加工制成品的優(yōu)質(zhì)原料,而且還是植物功能基因組研究的模式植物。隨著耕地的日益減少、病原菌和害蟲的侵害、環(huán)境的脅迫以及難以雜交授粉等問題的突顯,市場上急需高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的大豆新種質(zhì)或新品種。然而傳統(tǒng)的育種技術和手段,在大豆新種質(zhì)創(chuàng)制方面遇到了技術瓶頸。隨著大豆全基因組測序工作的完成和基因編輯技術的蓬勃發(fā)展,遺傳轉(zhuǎn)化技術為大豆種質(zhì)資源新材料的創(chuàng)制提供了快捷而有效的途徑。因此,構(gòu)建高效的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系就顯得十分必要。目前,關于大豆開展基因工程研究方面,利用根癌農(nóng)桿菌介導法以胚尖體系和子葉節(jié)體系為受體系統(tǒng)的報道比較多見。但是這兩個轉(zhuǎn)基因體系存在假陽性率高、嵌合體和轉(zhuǎn)化效率低的缺點。可見,探索全新的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系勢在必行。而可靠的遺傳轉(zhuǎn)化體系必須依賴于高效的離體再生系統(tǒng)。為了克服不定芽導致的遺傳轉(zhuǎn)化子的假陽性現(xiàn)象,本課題組以大豆品種“交大青豆”和“K06-82”為試驗材料,開展了大豆葉柄的離體...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
1 文獻綜述
    1.1 大豆離體再生的研究進展
        1.1.1 器官發(fā)生途徑
        1.1.2 體細胞胚胎發(fā)生
        1.1.3 原生質(zhì)體及單細胞再生
        1.1.4 大豆花粉、花藥再生
    1.2 大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進展
        1.2.1 農(nóng)桿菌介導法
        1.2.2 基因槍法
        1.2.3 花粉管通道法
        1.2.4 聚乙二醇(PEG)法
        1.2.5 其他轉(zhuǎn)化方法
    1.3 大豆轉(zhuǎn)基因面臨的問題及展望
2 材料與方法
    2.1 大豆葉柄離體再生體系初探
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
            2.1.2.1 大豆種子的消毒
            2.1.2.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
            2.1.2.3 外植體的取材
            2.1.2.4 大豆葉柄愈傷組織的誘導及繼代培養(yǎng)
            2.1.2.5 不定芽的誘導
            2.1.2.6 芽苗伸長
            2.1.2.7 生根
            2.1.2.8 煉苗與移栽
    2.2 大豆胚尖轉(zhuǎn)GMBZL2*的研究
        2.2.1 試驗材料
            2.2.1.1 植物材料
            2.2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.2.2 試驗方法
            2.2.2.1 質(zhì)粒載體導入農(nóng)桿菌EHA105及其鑒定
            2.2.2.2 農(nóng)桿菌EHA105工程菌制備
            2.2.2.3 試劑
            2.2.2.4 農(nóng)桿菌介導大豆胚尖遺傳轉(zhuǎn)化所需培養(yǎng)基及步驟
            2.2.2.5 影響大豆遺傳轉(zhuǎn)化的因素研究
            2.2.2.6 轉(zhuǎn)基因大豆的鑒定
    2.3 數(shù)據(jù)整理與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1
        3.1.1 NAA對大豆葉柄愈傷組織的誘導
        3.1.2 6-BA和NAA對大豆來源葉柄愈傷組織不定芽分化的影響
        3.1.3 TDZ和AGNO₃對大豆葉柄愈傷組織不定芽分化的影響
        3.1.4 赤霉素(GA₃)對芽苗伸長的影響
        3.1.5 無機鹽和IBA濃度對大豆植株生根的影響
    3.2 大豆胚尖體系轉(zhuǎn)GMBZL2*基因
        3.2.1 乙酰丁香酮(AS)對大豆轉(zhuǎn)化的效率影響
        3.2.2 菌液侵染時間對大豆轉(zhuǎn)化效率的影響
        3.2.3 抗生素濃度對抑菌的影響
        3.2.4 篩選方案對抗性芽再生的影響
        3.2.5 抗性芽苗的伸長
        3.2.6 抗性苗的生根
    3.3 大豆轉(zhuǎn)GMBZL2*基因的檢測
        3.3.1 GUS基因檢測
        3.3.2 PCR檢測
4 討論
    4.1 關于大豆葉柄離體再生體系的研究
        4.1.1 不同比例激素濃度對愈傷組織不定芽的誘導
        4.1.2 起始外植體材料對不定芽誘導的影響
        4.1.3 葉柄再生體系與胚尖再生體系和子葉節(jié)再生體系的比較
    4.2 關于大豆胚尖轉(zhuǎn)GMBZL2*基因
5 結(jié)論
6 創(chuàng)新點
參考文獻
附錄A
致謝
研究生學習期間發(fā)表文章情況



本文編號：3872580