發(fā)布時(shí)間：2023-12-10 14:24

　　大豆[Glycin max(Linn.)Merr],又名黃豆,古代稱為“菽”,是雙子葉植物豆科大豆屬的二倍體(2n=40)一年生草本植物。大豆既是重要的高蛋白糧飼兼用作物和油料作物,也是飼料和食品等工業(yè)加工制成品的優(yōu)質(zhì)原料,而且還是植物功能基因組研究的模式植物。隨著耕地的日益減少、病原菌和害蟲(chóng)的侵害、環(huán)境的脅迫以及難以雜交授粉等問(wèn)題的突顯,市場(chǎng)上急需高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的大豆新種質(zhì)或新品種。然而傳統(tǒng)的育種技術(shù)和手段,在大豆新種質(zhì)創(chuàng)制方面遇到了技術(shù)瓶頸。隨著大豆全基因組測(cè)序工作的完成和基因編輯技術(shù)的蓬勃發(fā)展,遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)為大豆種質(zhì)資源新材料的創(chuàng)制提供了快捷而有效的途徑。因此,構(gòu)建高效的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系就顯得十分必要。目前,關(guān)于大豆開(kāi)展基因工程研究方面,利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法以胚尖體系和子葉節(jié)體系為受體系統(tǒng)的報(bào)道比較多見(jiàn)。但是這兩個(gè)轉(zhuǎn)基因體系存在假陽(yáng)性率高、嵌合體和轉(zhuǎn)化效率低的缺點(diǎn)�？梢�(jiàn),探索全新的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系勢(shì)在必行。而可靠的遺傳轉(zhuǎn)化體系必須依賴于高效的離體再生系統(tǒng)。為了克服不定芽導(dǎo)致的遺傳轉(zhuǎn)化子的假陽(yáng)性現(xiàn)象,本課題組以大豆品種“交大青豆”和“K06-82”為試驗(yàn)材料,開(kāi)展了大豆葉柄的離體...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 大豆離體再生的研究進(jìn)展
        1.1.1 器官發(fā)生途徑
        1.1.2 體細(xì)胞胚胎發(fā)生
        1.1.3 原生質(zhì)體及單細(xì)胞再生
        1.1.4 大豆花粉、花藥再生
    1.2 大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法
        1.2.2 基因槍法
        1.2.3 花粉管通道法
        1.2.4 聚乙二醇(PEG)法
        1.2.5 其他轉(zhuǎn)化方法
    1.3 大豆轉(zhuǎn)基因面臨的問(wèn)題及展望
2 材料與方法
    2.1 大豆葉柄離體再生體系初探
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
            2.1.2.1 大豆種子的消毒
            2.1.2.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
            2.1.2.3 外植體的取材
            2.1.2.4 大豆葉柄愈傷組織的誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)
            2.1.2.5 不定芽的誘導(dǎo)
            2.1.2.6 芽苗伸長(zhǎng)
            2.1.2.7 生根
            2.1.2.8 煉苗與移栽
    2.2 大豆胚尖轉(zhuǎn)GMBZL2*的研究
        2.2.1 試驗(yàn)材料
            2.2.1.1 植物材料
            2.2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.2.1 質(zhì)粒載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105及其鑒定
            2.2.2.2 農(nóng)桿菌EHA105工程菌制備
            2.2.2.3 試劑
            2.2.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆胚尖遺傳轉(zhuǎn)化所需培養(yǎng)基及步驟
            2.2.2.5 影響大豆遺傳轉(zhuǎn)化的因素研究
            2.2.2.6 轉(zhuǎn)基因大豆的鑒定
    2.3 數(shù)據(jù)整理與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1
        3.1.1 NAA對(duì)大豆葉柄愈傷組織的誘導(dǎo)
        3.1.2 6-BA和NAA對(duì)大豆來(lái)源葉柄愈傷組織不定芽分化的影響
        3.1.3 TDZ和AGNO₃對(duì)大豆葉柄愈傷組織不定芽分化的影響
        3.1.4 赤霉素(GA₃)對(duì)芽苗伸長(zhǎng)的影響
        3.1.5 無(wú)機(jī)鹽和IBA濃度對(duì)大豆植株生根的影響
    3.2 大豆胚尖體系轉(zhuǎn)GMBZL2*基因
        3.2.1 乙酰丁香酮(AS)對(duì)大豆轉(zhuǎn)化的效率影響
        3.2.2 菌液侵染時(shí)間對(duì)大豆轉(zhuǎn)化效率的影響
        3.2.3 抗生素濃度對(duì)抑菌的影響
        3.2.4 篩選方案對(duì)抗性芽再生的影響
        3.2.5 抗性芽苗的伸長(zhǎng)
        3.2.6 抗性苗的生根
    3.3 大豆轉(zhuǎn)GMBZL2*基因的檢測(cè)
        3.3.1 GUS基因檢測(cè)
        3.3.2 PCR檢測(cè)
4 討論
    4.1 關(guān)于大豆葉柄離體再生體系的研究
        4.1.1 不同比例激素濃度對(duì)愈傷組織不定芽的誘導(dǎo)
        4.1.2 起始外植體材料對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
        4.1.3 葉柄再生體系與胚尖再生體系和子葉節(jié)再生體系的比較
    4.2 關(guān)于大豆胚尖轉(zhuǎn)GMBZL2*基因
5 結(jié)論
6 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄A
致謝
研究生學(xué)習(xí)期間發(fā)表文章情況



本文編號(hào)：3872580