玉米產量是一個極其復雜的數量性狀,不僅受遺傳因素的調控,受環(huán)境因素的影響也十分明顯。實際田間生產中,玉米的單穗重量、穗長度、百粒重、粒寬、粒長等遺傳性狀決定了玉米產量。ZmTE1基因屬于mei2-like家族,對玉米早期葉片的生長發(fā)育具有重要的調節(jié)作用,其玉米突變體表現(xiàn)出明顯的植株矮小,節(jié)間距離縮短,葉片增多。本實驗室在轉基因水稻中過表達ZmTE1的同源基因OsTEL發(fā)現(xiàn),轉基因水稻的千粒重、粒寬、粒長等產量性狀明顯變大,因此我們推測ZmTE1可能具有提高玉米產量的潛能。本文研究的轉基因玉米AM16利用農桿菌介導法轉入抗草甘膦基因G10evo和來源于玉米的 ZmTE1 基因的 T-DNA(載體為 1300-p35S-pUbi-G10evo-pAu-ZmTE1),獲得不同的轉基因玉米事件,選取其中生長發(fā)育良好,產量性狀有明顯變化的轉化事件AM16,對其進行分子生物學特征和農藝性狀的研究和統(tǒng)計分析。轉基因玉米AM16的分子特征研究結果表明:PCR擴增表明轉基因玉米AM16含有目的基因G10evo基因和ZmTE1基因;以G10evo基因為探針的Southern blot檢測顯示AM16中插入...

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【學位級別】：碩士

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致謝
摘要
Abstract
1. 文獻綜述
    1.1 轉基因玉米研究進展
        1.1.1 引言
        1.1.2 轉基因抗草甘膦( Glyphosate )玉米研究進展
            1.1.2.1 草甘膦及其在雜草防治中的應用
            1.1.2.2 草甘膦的雜草防治的作用機理
            1.1.2.3 作物抗草甘膦策略
            1.1.2.4 轉EPSPS基因抗除草劑玉米研究現(xiàn)狀
        1.1.3 玉米產量相關性狀
            1.1.3.1 株高
            1.1.3.2 玉米穗和顆粒
    1.2 ZmTE1家族基因研究進展
        1.2.1 TE1基因的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 TE1基因的表達
    1.3 本研究的目的和意義
2. 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株和質粒載體
    2.3 主要工具酶
    2.4 常用試劑、核酸、蛋白分子質量及試劑盒
    2.5 培養(yǎng)基的配制
    2.6 常用生化試劑和溶液
    2.7 儀器
    2.8 實驗方法
        2.8.1 分子生物學實驗方法
            2.8.1.1 基因組DNA提取
            2.8.1.2 PCR技術
            2.8.1.3 凝膠回收
            2.8.1.4 高保真酶擴增產物加A反應
            2.8.1.5 連接反應
            2.8.1.6 大腸桿菌感受態(tài)細胞的轉化
            2.8.1.7 挑單克隆細胞
            2.8.1.8 質粒微量提取
            2.8.1.9 酶切反應
            2.8.1.10 大腸桿菌TG1感受態(tài)細胞的制備
            2.8.1.11 Genome Walker
            2.8.1.12 Western blot
            2.8.1.13 Southern blot
            2.8.1.14 EPSPS速測
            2.8.1.15 總RNA提取、純化和cDNA第一鏈的合成
            2.8.1.16 qRT PCR
        2.8.2 農藝性狀和產量統(tǒng)計方法
            2.8.2.1 農藝性狀統(tǒng)計
            2.8.2.2 產量性狀統(tǒng)計
        2.8.3 統(tǒng)計方法
    2.9 溫室轉基因玉米植株杭性測定
3. 結果與分析
    3.1 轉基因玉米PCR鑒定
    3.2 T -DNA插入位點確定
    3.3 轉基因玉米拷貝數鑒定
    3.4 轉基因玉米ZmTE1的相對轉錄水平分析
    3.5 轉基因玉米G10evo蛋白表達分析
    3.6 轉基因玉米表型差異分析
    3.7 轉基因玉米農藝性狀統(tǒng)計分析
        3.7.1 葉片數量和株高
        3.7.2 節(jié)間距和節(jié)間數量
        3.7.3 相鄰葉間數量
        3.7.4 葉間距離
    3.8 轉基因玉米產量性狀分析
4 總結與討論
    4.1 總討論
    4.2 創(chuàng)新之處
    4.3 展望
參考文獻
附錄
    附錄A 常用培養(yǎng)基配方
    附錄B 常用生化試劑、溶液
        常用生化試劑
        溶液
    附錄C 常用儀器



本文編號：3852391