本研究以近等基因系白色棉品種RT白絮和棕色棉品種棕1-61為材料,從形態(tài)學方面對纖維分化發(fā)育和色素沉積分布進行了研究;利用熒光定量PCR技術(shù)分析了類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在不同組織中的表達模式;通過酵母單雜交技術(shù)驗證MYB轉(zhuǎn)錄因子基因與類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因的關(guān)系;通過胚珠離體培養(yǎng)實驗分析MeJA對類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達水平的影響;通過田間噴施MeJA分析MeJA對棉纖維色差及纖維品質(zhì)的影響。本研究主要結(jié)論如下:1.比較RT白絮和棕1-61棉纖維分化發(fā)育規(guī)律棕1-61胚珠表皮細胞突起較早,且發(fā)育較快,纖維分化發(fā)育早于RT白絮;棕1-61從10dpa開始已經(jīng)在棉纖維細胞壁邊緣形成染色較深的黑色致密物質(zhì),并隨著次生壁加厚,細胞脫水,黑色致密物質(zhì)逐漸靠近纖維細胞中腔,并最終沉積于纖維細胞中腔。推測該黑色致密物有可能就是棕色棉棉纖維中的色素。2.分析棕色棉不同組織類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達水平類黃酮合成途徑中的結(jié)構(gòu)基因在棕1-61和RT白絮中均無組織特異性表達。GhUFGT基因與其他結(jié)構(gòu)基因的表達模式不同,它在棕1-61花后25天和30天仍...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 天然彩色棉的研究進展
        1.1.1 色素成分
        1.1.2 類黃酮合成途徑
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子與類黃酮的合成
    1.3 影響類黃酮合成的外部因素
    1.4 類黃酮與纖維發(fā)育
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 棕色棉纖維分化發(fā)育規(guī)律的研究
    2.1 試驗材料
    2.2 取樣方法
    2.3 試驗方法
        2.3.1 棉纖維分化觀察方法
        2.3.2 棕色棉纖維色素分布觀察
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 棕色棉纖維分化發(fā)育規(guī)律
        2.4.2 棕色棉纖維色素沉積分布規(guī)律
    2.5 討論
        2.5.1 棕色棉纖維分化發(fā)育規(guī)律
        2.5.2 棕色棉纖維色素沉積分布規(guī)律
第三章 棕色棉類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達分析
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
        3.2.1 棉花各組織總RNA的提取
        3.2.2 cDNA的合成
        3.2.3 實時熒光定量（Real-time quantitative PCR, qPCR）檢測
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在白色棉和棕色棉纖維不同時期中的表達分析
        3.3.2 類黃酮合成途徑中后期結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在白色棉和棕色棉根莖葉中的表達分析
    3.4 討論
        3.4.1 類黃酮合成途徑中結(jié)構(gòu)基因在白色棉和棕色棉纖維不同時期及不同組織中的表達差異
        3.4.2 類黃酮合成途徑相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子在白色棉和棕色棉纖維不同時期及不同組織中的表達差異
第四章 棕色棉中MYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆及酵母單雜交功能驗證
    4.1 試驗材料
    4.2 試驗方法
        4.2.1 棉花總RNA的提取及cDNA的合成
        4.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子基因克隆
        4.2.3 T載體的連接及轉(zhuǎn)化
        4.2.4 棕色棉類黃酮合成途徑中關(guān)鍵酶基因啟動子分析
        4.2.5 構(gòu)建誘餌表達載體
        4.2.6 獲得含誘餌表達載體pBait-AbAi的酵母菌株
        4.2.7 利用AbAr的表達檢測誘餌菌株
        4.2.8 構(gòu)建酵母單雜交的獵物表達載體
        4.2.9 點對點驗證MYB轉(zhuǎn)錄因子與類黃酮合成過程中結(jié)構(gòu)基因的互作
        4.2.10 構(gòu)建亞細胞定位的表達載體
        4.2.11 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.12 煙草葉片亞細胞定位
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子基因克隆結(jié)果
        4.3.2 結(jié)構(gòu)基因GhDFR、GhANS、GhANR和GhUFGT的啟動子分析
        4.3.3 構(gòu)建誘餌表達載體（bait）
        4.3.4 轉(zhuǎn)化酵母菌株
        4.3.5 抑制誘餌酵母菌株生長的最低AbA濃度
        4.3.6 酵母單雜交中獵物表達載體（prey）的構(gòu)建
        4.3.7 點對點驗證MYB轉(zhuǎn)錄因子與類黃酮合成過程中結(jié)構(gòu)基因的互作結(jié)果
        4.3.8 亞細胞定位表達載體的構(gòu)建
        4.3.9 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌鑒定
        4.3.10 煙草葉片亞細胞定位觀察
    4.4 討論
第五章 MeJA處理下的胚珠離體培養(yǎng)
    5.1 試驗材料
    5.2 試驗方法
        5.2.1 胚珠離體培養(yǎng)
        5.2.2 離體培養(yǎng)后纖維RNA提取
        5.2.3 離體培養(yǎng)后纖維cDNA的合成
        5.2.4 實時熒光定量（(Real-time quantitative PCR, qPCR）檢測
        5.2.5 數(shù)據(jù)處理
    5.3 結(jié)果與分析
    5.4 討論
第六章 田間噴施MeJA對棕色棉顏色及纖維品質(zhì)的影響
    6.1 試驗材料
    6.2 試驗方法
        6.2.1 田間噴施MeJA
        6.2.2 分光測色儀測定彩色棉色澤的變化規(guī)律
        6.2.3 棕色棉纖維品質(zhì)
    6.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 不同濃度MeJA處理時棉纖維色值的變化
        6.4.2 不同濃度MeJA處理時棉纖維色差的變化
        6.4.3 不同濃度MeJA處理時的棉纖維品質(zhì)
    6.5 討論
第七章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3830260