銀杏是現(xiàn)存古老的孑遺植物,其具有豐富的藥理活性及食用價(jià)值,主要生理活性成分為類黃酮和萜內(nèi)酯。銀杏類黃酮具有消除自由基、抗氧化、抗腫瘤、治療心血管疾病等藥理活性,其藥用價(jià)值受到全世界的廣泛關(guān)注,提高類黃酮含量已成為目前研究銀杏的熱點(diǎn)。傳統(tǒng)栽培育種周期較長且見效慢,基因工程大多集中在改造類黃酮生物合成途徑中單個(gè)關(guān)鍵酶基因上,然而類黃酮的合成途徑復(fù)雜,并不是由一兩個(gè)關(guān)鍵基因所能決定的。轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控類黃酮生物合成相關(guān)多個(gè)關(guān)鍵基因的表達(dá),從而提高類黃酮含量的積累。因此,研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面是提高類黃酮生物合成的另一個(gè)手段。本文利用已構(gòu)建的銀杏葉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,采用RACE生物技術(shù),從銀杏葉片中成功篩選克隆得到3個(gè)GbWD40基因序列,分別命名為GbWD401、GbWD402和GbWD403。并對3個(gè)GbWD40轉(zhuǎn)錄因子基因序列特征進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測3個(gè)GbWD40基因在銀杏不同組織部位及外源脅迫處理下的表達(dá)模式,并構(gòu)建融合表達(dá)載體進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。主要內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)GbWD401基因包含一段2313bp的開放閱讀框,編碼一個(gè)長770aa的肽鏈,預(yù)測其編碼的...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
    1.1 黃酮類化合物
        1.1.1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.2 黃酮類化合物的功能作用
        1.1.3 提高銀杏中類黃酮含量的研究
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子的研究方法
    1.3 轉(zhuǎn)錄因子WD40
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄因子WD40的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄因子WD40的功能
    1.4 本課題研究目的及意義
第2章 銀杏轉(zhuǎn)錄因子WD40基因克隆及表達(dá)量分析
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 生物學(xué)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基與緩沖液
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 銀杏樣本總RNA的提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
        2.2.3 銀杏WD40轉(zhuǎn)錄因子基因中間片段的克隆
        2.2.4 銀杏WD40轉(zhuǎn)錄因子基因的 3’-RACE
        2.2.5 銀杏WD40轉(zhuǎn)錄因子基因的 5’-RACE
        2.2.6 目的片段的回收
        2.2.7 目的基因與載體的連接
        2.2.8 銀杏WD40轉(zhuǎn)錄因子基因cDNA全長的擴(kuò)增
        2.2.9 利用實(shí)時(shí)熒光定量分析Gb WD40基因的表達(dá)
        2.2.10 酶切處理表達(dá)載體
        2.2.11 目的片段與酶切產(chǎn)物連接
        2.2.12 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.2.13 提取大腸桿菌質(zhì)粒
        2.2.14 土壤農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化
        2.2.15 亞細(xì)胞定位
        2.2.16 生物信息學(xué)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 銀杏總RNA的檢測
        3.1.1 Gb WD401基因
        3.1.2 Gb WD402基因
        3.1.3 Gb WD403基因
    3.2 討論
        3.2.1 銀杏Gb WD40轉(zhuǎn)錄因子功能分析
        3.2.2 銀杏Gb WD40基因的表達(dá)量分析
        3.2.3 融合表達(dá)載體的構(gòu)建
第4章 結(jié)論
    4.1 研究結(jié)論
        4.1.1 Gb WD401基因的克隆與表達(dá)量分析
        4.1.2 Gb WD402基因的克隆與表達(dá)量分析
        4.1.3 Gb WD403基因的克隆與表達(dá)量分析
    4.2 本文創(chuàng)新點(diǎn)
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3807828