紫花苜蓿素有“牧草之王”的稱呼,是我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展所需粗蛋白的重要來(lái)源,低溫是影響紫花苜蓿生長(zhǎng)導(dǎo)致產(chǎn)量下降的主要逆境之一。黃花苜蓿(Medicago falcata L.)是一種非常耐寒、耐旱的豆科牧草,是苜�？剐杂N的重要基因庫(kù),從中挖掘抗寒相關(guān)基因?qū)τ谂嘤匣ㄜ俎？购缕贩N十分重要。本文對(duì)響應(yīng)低溫的Mf WAK和MsLRPK基因的功能進(jìn)行分析,主要研究結(jié)果如下:通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將過(guò)表達(dá)Mf WAK基因的載體轉(zhuǎn)化截形苜蓿,獲得轉(zhuǎn)基因植株,經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè),獲得5株陽(yáng)性植株,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Mf WAK基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株編號(hào)A35-8、A14、A41、A1-4、A17中Mf WAK基因得到較高水平的表達(dá),不同株系間的表達(dá)量存在差異,株系編號(hào)A1-4的Mf WAK基因表達(dá)量最高。對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的抗寒性進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示野生型的半致死溫度為-2℃左右,轉(zhuǎn)基因植株的半致死溫度在-3℃到-6℃之間,與野生型的差異顯著。轉(zhuǎn)基因植株中A1-4半致死溫度最低(為-6℃),A17半致死溫度最高(為-3℃)。結(jié)果表明表達(dá)Mf WAK基因能提高截形苜�？购�。本實(shí)驗(yàn)室前期研究中,發(fā)...

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 低溫對(duì)植物的影響
    1.2 黃花苜蓿和紫花苜蓿的抗寒性差異
    1.3 CRISPR/ Cas9 基因編輯技術(shù)在植物中的應(yīng)用
    1.4 類受體蛋白激酶的研究進(jìn)展
    1.5 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
    2.2 材料培養(yǎng)與處理
        2.2.1 截形苜蓿的培養(yǎng)
        2.2.2 紫花苜蓿的培養(yǎng)
        2.2.3 材料的處理
    2.3 主要儀器設(shè)備和試劑
        2.3.1 主要儀器
        2.3.2 主要試劑
        2.3.3 培養(yǎng)基配方
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 總RNA的提取
        2.4.2 cDNA第一鏈的合成
        2.4.3 MsLRPK基因克隆
        2.4.4 MsLRPK打靶載體的構(gòu)建
        2.4.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化苜蓿
        2.4.6 轉(zhuǎn)基因苜蓿DNA的提取
        2.4.7 PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因苜蓿的bar基因
        2.4.8 PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的MsLRPK基因
        2.4.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4.10 半致死溫度測(cè)定
        2.4.11 相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 MFWAK基因的功能分析
        3.1.1 過(guò)表達(dá)MfWAK基因轉(zhuǎn)基因植物的分子檢測(cè)
        3.1.2 轉(zhuǎn)基因截形苜�？购苑治�
    3.2 MSLRPK基因的功能分析
        3.2.1 MsLRPK基因的克隆與核酸序列分析
        3.2.2 MsLRPK蛋白理化性質(zhì)預(yù)測(cè)
        3.2.3 MsLRPK蛋白的序列分析
        3.2.4 低溫對(duì)MsLRPK基因表達(dá)的影響
        3.2.5 MsLRPK基因敲除載體的構(gòu)建
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的分子檢測(cè)
        3.2.7 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿耐寒性分析
4 討論與結(jié)論
    4.1 MfWAK蛋白與植物的耐寒性
    4.2 MSLRPK蛋白與植物的耐寒性
    4.3 基因編輯技術(shù)CRISPR/ Cas9 在紫花苜蓿中的應(yīng)用
    4.4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄



本文編號(hào)：3794606