玉米是世界上主要的農(nóng)作物之一,隨著人們對玉米需求量的增加,玉米轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到迅速地發(fā)展。玉米外植體的選擇以及在組織培養(yǎng)各階段的狀態(tài)是限制玉米遺傳轉(zhuǎn)化的重要因素。本實(shí)驗(yàn)室從200多份玉米骨干自交系中篩選出骨干玉米自交系Y423,Y423具有高體胚誘導(dǎo)率,在沒有外源激素刺激的條件下可以同時分化出根和芽,進(jìn)而發(fā)育成健壯的植株等特點(diǎn)。在前人研究基礎(chǔ)上,為了尋找合適的玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體材料,本文探究了授粉不同時期幼胚、成熟胚及各器官的愈傷組織誘導(dǎo)、繼代和分化的不同影響因素,并研究了不同器官的愈傷組織誘導(dǎo)和繼代過程中的基因表達(dá)情況。研究發(fā)現(xiàn)Y423的不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最適2,4-D濃度不同,其中根和授粉13天的幼胚對生長素最敏感,誘導(dǎo)愈傷組織的最適生長素濃度最低,為2mg/L。幼胚的誘導(dǎo)率和II型愈傷組織率隨幼胚發(fā)育成熟而降低,成熟胚誘導(dǎo)的初代愈傷經(jīng)繼代培養(yǎng)后,能產(chǎn)生II型愈傷,并能夠分化成苗。根、莖、葉誘導(dǎo)的III型初代愈傷經(jīng)繼代培養(yǎng)后,在不同組合的6-BA和NAA的分化培養(yǎng)基上能分化出綠芽點(diǎn)。將授粉13天的幼胚誘導(dǎo)產(chǎn)生的I型、II型、III型愈傷組織在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng),結(jié)果表明,II型愈傷...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
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英文縮寫表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 玉米轉(zhuǎn)基因的研究進(jìn)展
        1.1.1 玉米轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)
        1.1.2 轉(zhuǎn)基因的基本方法
    1.2 玉米組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展
        1.2.1 基因型的影響
        1.2.2 外植體的選取
        1.2.3 培養(yǎng)基的影響
        1.2.4 植物生長調(diào)節(jié)劑的影響
    1.3 玉米體細(xì)胞胚胎發(fā)生的相關(guān)基因
        1.3.1 激素相關(guān)基因
        1.3.2 促進(jìn)體細(xì)胞胚胎發(fā)生的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    1.4 研究的目的與意義
第二章 玉米幼胚培養(yǎng)能力的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 果穗不同部位對幼胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        2.2.2 不同授粉時期對幼胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        2.2.3 不同類型愈傷繼代培養(yǎng)的研究
        2.2.4 不同類型愈傷分化的研究
        2.2.5 再生苗的生根培養(yǎng)
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 玉米成熟胚培養(yǎng)能力的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料和數(shù)據(jù)處理
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 數(shù)據(jù)處理
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 外植體無菌體系的建立
        3.2.2 2,4-D濃度對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.2.3 溫度對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.2.4 浸種時長對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.2.5 成熟胚愈傷的繼代培養(yǎng)
        3.2.6 成熟胚愈傷的分化
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 外植體無菌體系的建立
        3.3.2 2,4-D濃度對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.3.3 溫度對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.3.4 浸種時長對成熟胚誘導(dǎo)愈傷的影響
        3.3.5 成熟胚愈傷繼代培養(yǎng)的研究
        3.3.6 成熟胚愈傷分化的研究
    3.4 小結(jié)
第四章 玉米根、莖節(jié)及葉片培養(yǎng)能力的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 2,4-D濃度對根、莖節(jié)和葉片愈傷誘導(dǎo)的影響
        4.2.2 根和葉片不同部位愈傷組織的誘導(dǎo)
        4.2.3 根、莖節(jié)和葉片愈傷繼代和分化
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 2,4-D濃度對根、莖節(jié)和葉片愈傷誘導(dǎo)的影響
        4.3.2 根和葉片不同部位誘導(dǎo)愈傷的研究
        4.3.3 根、莖節(jié)和葉片愈傷繼代和分化的研究
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 玉米不同外植體愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 總RNA提取
        5.2.2 RNA的質(zhì)量檢測
        5.2.3 反轉(zhuǎn)錄及cDNA的合成
        5.2.4 qRT-PCR的引物
        5.2.5 qRT-PCR反應(yīng)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 RNA的質(zhì)量和純度檢測
        5.3.2 授粉不同時期幼胚中的基因表達(dá)分析
        5.3.3 幼胚愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
        5.3.4 不同類型愈傷中的基因表達(dá)分析
        5.3.5 成熟胚愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
        5.3.6 根愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
        5.3.7 莖節(jié)愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
        5.3.8 葉片愈傷發(fā)生過程中的基因表達(dá)分析
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 利用玉米Y423 體細(xì)胞胚胎進(jìn)行Zm C2 基因Cas9 載體的遺傳轉(zhuǎn)化
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 受體材料
        6.1.2 菌株和載體
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        6.1.4 培養(yǎng)基
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米體細(xì)胞胚胎的轉(zhuǎn)化
        6.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的檢測
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的體細(xì)胞胚胎遺傳轉(zhuǎn)化
        6.3.2 T0 代轉(zhuǎn)化植株的PCR分子檢測
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
第七章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



本文編號：3761822