發(fā)布時間：2023-02-07 21:56

　　水稻是世界上重要的糧食作物,在我國國民經(jīng)濟中占有重要地位。稻田除草貫穿于水稻的整個生產(chǎn)過程中,增加了相當(dāng)一部分勞動力和經(jīng)濟投入�；瘜W(xué)除草劑的使用為降低水稻生產(chǎn)成本具有非常重要的意義,草甘膦是廣譜、高效、低毒、廉價的內(nèi)吸傳導(dǎo)型除草劑,但因其對水稻也具有致死作用而無法在稻田大面積使用。通過基因工程手段培育具有草甘膦抗性的轉(zhuǎn)基因水稻不僅能夠節(jié)約稻田除草的成本、減少勞動力投入、降低除草劑使用量還能提高農(nóng)民收入具有非常好的應(yīng)用前景。但是隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)基因安全性問題也受到廣泛關(guān)注,尤其是花粉介導(dǎo)的的外源基因飄流問題,一直是公眾和部分科研界人士的關(guān)注熱點,通過基因拆分技術(shù)能夠在很大程度上降低轉(zhuǎn)基因飄流的頻率。因此,本研究將表達G2-EPSPS蛋白的G2-aroA基因轉(zhuǎn)入水稻,培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因水稻,探索轉(zhuǎn)G2-aroA基因水稻對草甘膦的抗性。并通過基因拆分技術(shù)研究通過Intein介導(dǎo)拆分的G2-EPSPS蛋白在轉(zhuǎn)基因水稻雜交后代中重新組裝后的草甘膦抗性與轉(zhuǎn)完整G2-aroA基因水稻抗性的區(qū)別,研究拆分后蛋白質(zhì)重新組裝效率,為基因拆分技術(shù)限控水稻基因飄流的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。研究結(jié)果如下:...

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 草甘膦及抗草甘膦作物的研究
        1.1.1 草甘膦的作用機制
        1.1.2 作物獲得草甘膦抗性的機制
        1.1.3 耐草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的全球發(fā)展態(tài)勢
        1.1.4 抗草甘膦水稻的研究現(xiàn)狀
        1.1.5 G2-aroA基因賦予作物草甘膦抗性的研究
    1.2 轉(zhuǎn)化事件特異性PCR檢測
    1.3 基因拆分技術(shù)降低轉(zhuǎn)基因飄流的研究
        1.3.1 基因拆分技術(shù)的理論基礎(chǔ)
        1.3.2 內(nèi)含肽的結(jié)構(gòu)及分類
        1.3.3 Intein的剪接機制
        1.3.4 天然斷裂內(nèi)含肽SspDnaEIntein的研究
        1.3.5 基因拆分在植物中應(yīng)用的可行性
        1.3.6 基因拆分后在植物中的重新組裝效率
    1.4 本研究的目的意義及研究思路
第二章 抗草甘膦水稻的培育及轉(zhuǎn)化事件特異性檢測方法的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 轉(zhuǎn)基因水稻獨立轉(zhuǎn)化事件的鑒定
        2.2.2 種子萌發(fā)對草甘膦耐受性試驗
        2.2.3 外源噴施條件下草甘膦耐受能力
        2.2.4 水培條件下草甘膦耐受能力
        2.2.5 水稻轉(zhuǎn)化事件特異性檢測及純合系鑒定方法的建立
    2.3 討論
第三章 基因拆分技術(shù)在水稻中的應(yīng)用效果
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗方法
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因水稻中目標基因的整合位點分析
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因水稻拷貝數(shù)分析
        3.2.3 純合系篩選和雜交水稻的獲得
        3.2.4 盆栽條件下草甘膦耐受能力
        3.2.5 雜交材料水培條件下草甘膦耐受能力
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因水稻的RNA表達量分析
        3.2.7 不同類型轉(zhuǎn)基因水稻的草甘膦抗性分析
        3.2.8 轉(zhuǎn)基因水稻中目標蛋白的表達量分析
        3.2.9 Intein的安全性
    3.3 討論
第四章 結(jié)論和創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3737491